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Previous issue date: 2017-10-25 === A hemostasia é o evento pelo qual os mamíferos bloqueiam a perda de volemias
sanguíneas e promovem o reparo de lesões, e falhas por excessos contribuem para
a propagação de fatores inflamatórios e trombóticos. As consequências da
aterosclerose são exemplos de agravos desse tipo e a heparina (Hep) é um fármaco
de escolha para esses tratamentos. Pacientes com carência de antitrombina têm
resistência aos efeitos anticoagulantes da Hep, então pesquisas por novas
moléculas homeostáticas que contribuam com os tratamentos clínicos são
necessárias. Inibidores de proteinases vegetais têm sido eficazes em controlar
processos biológicos, como coagulação e inflamação. O presente trabalho objetivou
isolar um inibidor de tripsina da semente de Juquiri (JTI) verificando sua atividade
contra serinoproteinases, e avaliar seus potenciais anticoagulante e anti-inflamatório.
O inibidor foi isolado por cromatografia de afinidade e troca-iônica, apresentando
duas principais bandas proteicas de 11,9 e 19,2 kDa estimadas por SDS-PAGE, e foi
capaz de inibir tripsina e quimotripsina. Na coagulação, o JTI prolongou o tempo de
tromboplastina parcial (APTT) em concentrações superiores à 2 µg/100 µL de
plasma, sem prolongar o tempo de protrombina (PT). Associado à Hep, o JTI foi
capaz de intensificar o efeito anticoagulante do fármaco em ambos os testes. Sem
apresentar toxicidade contra eritrócitos humanos o JTI reduziu 40% das
concentrações de elastase liberada por neutrófilos induzidos por PAF (fator ativador
de plaquetas). O JTI em concentrações entre 20-80 µg/mL estimulou a produção de
TNF por macrófagos RAW 264.7 em cultura sem provocar outros estímulos
inflamatórios. Macrófagos ativados por LPS tiveram redução nas concentrações de
NO, IL-6 e TNF quando tratados com JTI em concentrações entre 20-160 µg/mL.
Estes dados apontam o JTI como promissor no tratamento de doenças trombóticas e
inflamatórias, tendo sido eficaz como adjuvante da heparina e em promover a
redução de estímulos inflamatórios de neutrófilos por vias provavelmente
dependentes de MAPK, e em macrófagos por vias do fator de transcrição NF-κB. === Hemostasis is the event that mammals use to block the loss of blood and promote
injury repair, and failure by overeating contributes to the spread of inflammatory and
thrombotic factors. Atherosclerosis is an example of such diseases, and heparin
(Hep) is a treatment drug. Patients with antithrombin deficiency have resistance to
the anticoagulant effects of Hep, so researches for novel homeostatic molecules that
contribute to clinical treatments are necessary. Plant protease inhibitors have been
effective in controlling biological processes, such as coagulation and inflammation.
The present work aimed isolate a trypsin inhibitor from the Juquiri (JTI) seed and
evaluate its activity against serine proteases, and its anticoagulant and antiinflammatory
potentials. JTI was isolated by affinity and ion exchange
chromatography, presenting two major protein bands of 11.9 and 19.2 kDa on SDSPAGE,
and was able to inhibit trypsin and chymotrypsin. In coagulation, JTI
prolonged partial thromboplastin time (APTT) at concentrations greater than 2 μg/100
μL plasma, without prolonging prothrombin time (PT). Associated with Hep, JTI was
able to enhance the anticoagulant effect of the drug in both tests. Without toxicity to
human erythrocytes, JTI reduced 40% of elastase concentrations released by
neutrophils induced by platelet activating factor (PAF). JTI at concentrations between
20-80 μg/mL stimulated TNF production by macrophages (RAW 264.7) in culture
without provoking other inflammatory stimuli. LPS-activated macrophages had a
reduction in NO, IL-6 and TNF productions when treated with JTI at 20-160 μg/mL
concentrations. These data point to JTI as promising in the treatment of thrombotic
and inflammatory diseases and have been effective as heparin adjuvant and to
promote the reduction of neutrophil inflammatory stimuli likely by MAPK-dependent
pathways and in macrophages by NF-κB transcription factor pathways.
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