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Previous issue date: 2007-11-05 === To aureus α-HL channel, we used the cysteine-scanning mutagenesis technique. Twenty-four mutants were produced from the substitution of a single aminoacid of the primary structure of the α-HL pro this yzed after the incorporation of a mutant channel in planar lipid bilayer membranes. The modified proteins were studied in the absence and presence of watersoluble specific sulphydryl-specific reagents, in order to introduce a strong positive or negative harge at positions of substitution. The introduction of a negative charge in the stem region onverted the selectivity of the channel from weak anionic to more cationic. However, the
troduction of a positive charge increased its selectivity to the anion. The degree of these alterations was inversely dependent on the channel radius at the position of the introduced harge (selectivity). As to the asymmetry of the conductance-voltage, the influence of the harge was more complex. The introduction of the negative charge in the stem region (the trans art of the pore) provoked a decrease. The intensity of these alterations depended on the radius, and on the type of free charge at the pore entrance. These results suggest that the free charge
at surrounds the pore wall is responsible for the cation-anion selectivity of the channel. The istribution of the charges between the entrances is crucial for determining the asymmetry of e conductance-voltage curves. We hope that these results serve as a model for studies with
other nanometric channels, in biological or planar lipid bilayer membranes or in iotechnological applications === Para investigar as influ?ncias das cargas sobre as propriedades do canal formado pela α-HL do Staphylococcus aureus, foi empregada a t?cnica de Escaneamento Mutagenese da Ciste?na . Vinte e quatro mutantes foram produzidos a partir da substitui??o de um ?nico amino?cido da estrutura prim?ria da prote?na α-HL pela ciste?na, em v?rias posi??es. As altera??es eletrofisiol?gicas, em decorr?ncia dessa modifica??o, foram analisadas, ap?s a incorpora??o do canal mutante em bicamada lip?dica plana. As prote?nas modificadas foram investigadas na aus?ncia e na presen?a de reagentes espec?ficos para sulfidrila, visando introduzir uma forte carga positiva ou negativa na posi??o da substitui??o. A introdu??o de uma carga negativa, na regi?o troncular (parte trans do poro) do canal formado pela α-HL, converteu a seletividade do canal de pouco ani?nico para mais cati?nico, entretanto a introdu??o de uma carga positiva aumentou, sua seletividade ao anion. A intensidade dessas altera??es foi inversamente dependente do raio do poro na posi??o da carga introduzida. Quanto ao par?metro assimetria da depend?ncia da condut?ncia-voltagem, a influ?ncia da carga foi mais complexa: a incorpora??o de uma carga negativa na regi?o troncular induziu aumento da assimetria, j? a incorpora??o ? regi?o copal (parte cis do poro) provocou uma diminui??o. A intensidade destas altera??es dependeu do raio, do tipo da carga m?vel introduzida sobre o eixo longitudinal do canal, sendo maior nas posi??es das cargas pr?xima das entradas do poro. Esses resultados sugerem que a carga livre que reveste a parede do lume do poro seja respons?vel pela seletividade c?tion-anion do canal. Considerando que a distribui??o das cargas entre as entradas seja fundamental, para determinar a assimetria da curva de depend?ncia condut?ncia-voltagem. N?s esperamos que esses resultados sirvam de modelo para estudos com outros canais de dimens?es nanom?tricas, em membranas biol?gicas ou bicamadas lip?dicas planas e para aplica??es biotecnol?gicas
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