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Previous issue date: 2006-04-18 === Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior === This work studies the involved enzymatic way in the metabolism of glycosaminoglycans sulfateds in the mollusc Pomacea sp. Had been identified endoglycosidases and exoglycosidases in the enzymatic extract of the mollusc Pomacea sp by means of hydrolysis activity in condroitim sulphate of whale cartilage and of the p-Nitrofenil-?-glucuronide, respectively. The enzymatic extracts qere obtained of Pomacea sp. being used of 0.1 sodium acetate buffer, pH 5.0 and later centrifugated the 8,000 x g and the presents proteins in the sobrenadante were submitted to the fractionament with two crescents ammonium sulphate concentrations, the visualized activity biggest in the F2 fraction (50-80%). The ?-glucuronidase (F3) was isolated in gel chromatography filtration Biogel 1.5m, the purification degree was ratified in Chromatography Liquid of high efficiency (HPLC). The enzyme was purificated 6.362,5 times with 35,6% yield. The ? -glucuronidase isolated in this work showed a molecular mass of 100 kDa, determined for eletroforese in poliacrilamida gel . The determination of the ideal kinetic parameters for the catalysis of the p-nitrofenil- ? -glucuronide for ?-glucuronidase, showed excellent activity in pH 5,0 and temperature 65?C for 6 hours and apparent Km of 72 x 10-2 mM. It is necessary for the total degradation of 3mM of p-N-?-glucoronide, the amount of 1,2?g of ss-glucuronidase. The BaCl2 increased the activity of ss-glucuronidase, and the activity was inhibited completely by the composites SDS and NaH2PO4 === Esse trabalho estuda a via enzim?tica envolvida no metabolismo de glicosaminoglicanos sulfatados no molusco Pomacea sp. Foram identificadas atividades exo e endoglicosid?sicas no extrato prot?ico do molusco Pomacea sp por meio de hidr?lise do p-Nitrofenil-?-glucuron?deo e atividade em condroitim sulfato de cartilagem de baleia, respectivamente. O tecido obtido do molusco foi homogeneizado a 4?C com tamp?o acetato de s?dio, em seguida centrifugado a 8.000 x g e a prote?na presente no sobrenadante foi submetida ao fracionamento com crescentes concentra??es de sulfato de am?nio, sendo a atividade glicosid?sica maior visualizada na fra??o F2 (50-80%). A ?-glucuronidase (F3) foi isolada em cromatografia de gel filtra??o Bio-gel A 1.5m, o grau de purifica??o de 6.362,5 vezes foi ratificado em Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) com um rendimento de 35,6%. A ?-glucuronidase isolada neste trabalho apresenta uma massa molecular de 100 kDa, determinada por eletroforese em gel de poliacrilamida. A determina??o dos par?metros cin?ticos ideais para a cat?lise do p-nitrofenil-?-glucuron?deo pela ?-glucuronidase, apresentou atividade ?tima em pH 5,0 e temperatura de 65?C por 4 horas e um Km aparente de 72 x 10-2 mM. S?o necess?rias para a degrada??o total de 3mM de p-N-?-glucuron?deo, a quantidade de 1,2mg de ?-glucuronidase. O BaCl2 aumentou a atividade da ?-glucuronidase e a atividade foi inibida completamente pelos compostos SDS e NaH2PO4
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