Geração de cDNAs, primers e caracterização estrutural do tegumento de sementes de soja

• Main Author: Miranda, Helen Lúcia da Cruz
• Other Authors: CPF:61465771972
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pelotas 2014
• Subjects: Sementes; Glycine max; Tegumento; Lignina; Alongase; Permeabilidade; Seeds; Seed coat; Lignin; Elongase; Permeability; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA
• Online Access: http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/ri/1495

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_helen_miranda.pdf: 927475 bytes, checksum: d105f02684c8c60f51894561bc5a61c7 (MD5) Previous issue date: 2008-07-11 === Soybean is one of the main world commodities and the seed is the key for high yields in this culture. Nevertheless, the soybean seed coat is the main modulator of seed quality, so, in this structure we could find answers for high seed quality production. The study goal is to identify structural contrasting traits, to obtain cDNA and to draw primers related to lignin synthesis and wax deposition in seed coat from two soybean genotypes. Plants were grown in greenhouse, flowers were identified and dated to follow the development after flowering until legumes were harvested (25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 and 60 days). Seed coats were then analyzed in electronic microscopy and used to build a soybean seed coat cDNA library for permeability traits (lignin synthesis and wax deposition). In silico, analyzes were performed to obtain specific primers to detect soybean seed coat lignin and wax biosynthesis genes. According to the seed coat traits, we identified differences in the palisade cell thickness between genotypes. The protocol based on litio chloride was efficient to extract total RNA from both genotypes in all phases. The unidirectional cDNA multiplication was efficient for the generation of enough cDNA quantity for future projects. In silico analyzes allowed the development of 16 primers related to lignin and wax deposition biosynthesis in soybean seed coat. === A soja é uma das principais commodities mundiais e a semente o principal insumo para sua produção. O tegumento das sementes é o principal modulador da qualidade, podendo ser encontrado, nessa estrutura a resposta para a produção de sementes com caracteres superiores para vigor e viabilidade. O estudo teve como objetivo identificar características estruturais contrastantes, obter cDNA e desenhar primers relacionados à síntese de lignina e deposição de cera em tegumentos de sementes de soja de genótipos contrastantes em relação à permeabilidade CD 202 (permeável) e IAC Santa Maria 702 (semipermeável). As plantas foram cultivadas em casa de vegetação e a partir da primeira floração as flores foram marcadas para que o tempo de desenvolvimento de cada legume fosse identificado. Legumes com 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 e 60 dias de desenvolvimento foram coletados e os tegumentos extraídos e armazenados para extração de RNA. Tegumentos com 25, 40, 55 e 70 dias de desenvolvimento dos genótipos de soja CD 202 e IAC Santa Maria 702 também foram submetidos a Microscopia Eletrônica. Após a extração do RNA total, foram obtidos os RNAm, seguido do cDNA. Em paralelo foi realizada análise in silico para desenho de primers específicos de genes envolvidos na rota metabólica da lignina e na deposição de cera nas sementes. Foram detectadas diferenças na espessura da camada paliçádica dos tegumentos de sementes de soja dos genótipos CD 202 e IAC Santa Maria 702. O protocolo a base de cloreto de lítio foi eficiente para extrair RNA total de ambos os genótipos em todas as fases de coleta. A estratégia de multiplicação unidirecional do cDNA foi eficiente para geração de um volume considerável para o desenvolvimento de estudos futuros de expressão diferencial de genes. A análise in silico permitiu o desenvolvimento de 16 primers relacionados aos genes da lignina e da elongase.