Caracterização de Leptospira spp. quanto à presença e conservação dos genes da família lig: importantes alvos para utilização em vacina e testes de diagnóstico

• Main Author: Cerqueira, Gustavo Maia de
• Other Authors: CPF:42251850015
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pelotas 2014
• Subjects: Biotecnologia; Leptospirose; Sequenciamento; Vacina; Diagnóstico; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
• Online Access: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/123456789/1245

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_gustavo_cerqueira.pdf: 757400 bytes, checksum: 75fc7b471af1fa029ccf13d06c0042eb (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 === Pathogenic Leptospira species contain one or more genes of the lig family, which code for Lig-family proteins. Lig proteins ( Leptospiral immunoglobulin-like proteins ) are considered important virulence factors, and they may be involved in tissue penetration and adhesion to host cells. Lig proteins have been implicated as the main factors involved in pathogenesis of Leptospira spp. Three genes, ligA, ligB and ligC are known, which code for proteins with the same name. The increasing interest in the characterization of the genes code for Lig proteins is due to their strong immunoprotective and diagnosis potential. Thus, it was necessary to evaluate the degree of conservation among Lig genes and proteins in order to predict their usefulness as antigens for the induction of a broad range protection. Four of the pathogenic species of Leptospira had the lig genes sequenced in this study, comprising L. interrogans, L. noguchii, L. weilli and L. borgpetersenii. Among the LigB proteins sequenced so far, LigB from L. interrogans Copenhageni FIOCRUZ L1-130 appears as the most conserved when compared to LigB from other species. The sequencing and comparative analysis of lig genes and proteins demonstrated a low identity among the different genomospecies of Leptospira spp. The alignment of lig genes sequences from all the genomospecies enabled us to design primers that allowed the amplification of a fragment from each gene. Such approach demonstrated that ligB gene is present in all the pathogenic species, while ligA gene is only found in L. interrogans and L. kirschneri and ligC gene is present in L. interrogans, L. kirschneri, L. weilli and some serovars of L. noguchii. The sequencing of the amplified fragment, derived from 33 serovars which comprise 6 genomospecies, and their comparative analysis together with the corresponding region from ligB sequences available in GenBank, enabled a phylogenetic analysis. It was possible to differentiate pathogenic species based on the DNA sequence of this ligB fragment. === Leptospiras patogênicas carregam um ou mais genes lig, os quais codificam para proteínas da família Lig. As proteínas Lig ( Leptospiral immunoglobulin-like ) são importantes fatores de virulência, e acredita-se que estejam envolvidos na penetração do tecido e na adesão da Leptospira às células do tecido hospedeiro. Até o presente momento, as proteínas Lig são apontadas como um dos principais fatores envolvidos na patogênese de Leptospira spp. Três genes, ligA, ligB e ligC são conhecidos, os quais codificam para proteínas com o mesmo nome. O interesse pela caracterização dos genes que codificam para as proteínas Lig surgiu pelo fato destas apresentarem potencial imunoprotetor e como antígenos para testes de diagnóstico. Frente a esta constatação, fez-se necessário conhecer o grau de conservação destes genes para inferir se a utilização de uma destas proteínas como antígeno vacinal seria capaz de induzir uma imunidade de amplo espectro. Dentre as espécies patogênicas de Leptospira, 4 tiveram seus genes lig seqüenciados neste estudo, as quais compreendem L. interrogans, L. noguchii, L. weilli e L. borgpetersenii. Entre as proteínas Lig seqüenciadas até o momento, LigB oriunda de L. interrogans Copenhageni FIOCRUZ L1-130 aparece como a mais conservada quando comparada com LigB de outras espécies. Com o alinhamento da seqüência dos genes lig das diversas espécies, foi possível desenhar primers capazes de amplificar por PCR um fragmento interno de cada um dos três genes. Esta abordagem permitiu comprovar a presença do gene ligB em todas as espécies patogênicas, enquanto ligA aparece apenas em L. interrogans e L. kirschneri, e ligC é encontrado nas espécies L. interrogans, L. kirschneri, L. weilli e alguns sorovares de L. noguchii. O seqüenciamento do fragmento de ligB amplificado por PCR a partir do DNA de 33 sorovares de 6 espécies, e sua análise comparativa juntamente com o fragmento correspondente pertencente aos genes ligB depositados no GenBank, possibilitou uma análise filogenética onde verificou-se que é possível diferenciar as espécies pela seqüência deste fragmento.