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Previous issue date: 2007-02-05 === Leptospiral immunoglobulin-like (Lig)proteins are exposed on membrane surface of
pathogenic Leptospira and may play a role in host cell attachment and invasion during
infection.A pair of Ligs,named LigA and LigB,with identical and non-identical
polypeptide regions has recently been identified.The two proteins elicit a strong
humoral immune response during acute host infection and have been suggested as
targets for development of vaccines and diagnostic tests for leptospirosis.This study
reports the production and characterization of monoclonal antibodies (Mabs)against
recombinant non-identical fragments of LigA (rLigANI)and LigB (rLigBNI).The
recombinant fragments were used for mice immunization and screening hybridomas
by indirect ELISA.Four Mabs obtained against rLigANI and six Mabs obtained
against rLigBNI were isotyped and evaluated regarding their potential for use in
studies of immunoprotection and diagnostic test development.The Mabs were of the
IgM (1),Ig 2b (3)and Ig 1 (6)isotypes and reacted with the native proteins from a
pathogenic strain of Leptospira i terroga s serovar Copenhageni L1 130 in an indirect
ELISA and immunofluorescence.Mabs affinity constants felt between 4x10 7 M -1 and
2x10 8 M -1 ,and epitope mapping by additive ELISA has shown that each Mab either
react with the same epitope in the recombinant molecule or cause steric hindrance.
Tissue sections from kidneys of hamsters experimentally infected with leptospires
and probed with the Mabs reacted positively by immunohistochemistry.These
findings suggest that the Mabs obtained can be useful for the studies of
immunoprotection and development of diagnostic tests. === As proteínas leptospiral immu oglobuli -like (Lig)estão expostas na superfície da
membrana das leptospiras patogênicas e podem estar envolvidas no ataque e
penetração às células do hospedeiro durante a infecção.Recentemente,foi
identificado um par de Ligs,nomeadas LigA e LigB,com regiões polipeptídicas
idênticas e não-idênticas.As duas proteínas estimulam uma resposta humoral forte
durante a infecção aguda no hospedeiro e têm sido sugeridas como alvos para o
desenvolvimento de vacinas e testes diagnósticos para leptospirose.Este estudo
relata a produção e caracterização de anticorpos monoclonais (Mabs)contra
fragmentos recombinantes não idênticos de LigA (rLigANI)e LigB (rLigBNI).Os
fragmentos recombinantes foram utilizados para a imunização dos camundongos e
triagem dos hibridomas por ELISA indireto.Quatro Mabs obtidos contra rLigANI e 6
Mabs contra rLigBNI foram isotipados e avaliados quanto ao seu potencial para uso
em estudos de imunoproteção e desenvolvimento de testes diagnósticos.Os Mabs
foram dos isotipos IgM (1),Ig 2b (3)and Ig 1 (6)e reagiram com as proteínas nativas
de Leptospira i terroga s sorovar Copenhageni cepa L1 130 em ELISA indireto e
imunofluorescência.A constante de afinidade dos Mabs manteve-se entre 4x10 7 M -1
and 2x10 8 M -1 ,e o mapeamento de epitopos por ELISA de aditividade demonstrou
que cada Mab reage com o mesmo epitopo na molécula recombinante ou causa um
impedimento espacial (steric hi dra ce ).Finalmente,os Mabs reagiram
positivamente em testes imuno-histoquímicos de seções do tecido renal de hamsters
experimentalmente infectados com leptospiras.Esses dados sugerem que os Mabs
obtidos podem ser usados para estudos de imunoproteção e desenvolvimento de
testes de diagnóstico de leptospirose.
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