Hemócitos de caranguejeiras da família Theraphosidae: ultracaracterização e purificação de peptídeos antimicrobianos

• Main Author: SOARES, Tatiana
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/2885145995086459
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pernambuco 2019
• Subjects: Aranha; Células sanguíneas; Peptídeos
• Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/28829

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima ([e-mail]) on 2018-11-07T19:32:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tatiana Soares.pdf: 3812281 bytes, checksum: 9d8978cdbc7fc6ed34da177668c1a889 (MD5) === Approved for entry into archive by Alice Araujo ([e-mail]) on 2019-01-25T14:46:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tatiana Soares.pdf: 3812281 bytes, checksum: 9d8978cdbc7fc6ed34da177668c1a889 (MD5) === Made available in DSpace on 2019-01-25T14:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tatiana Soares.pdf: 3812281 bytes, checksum: 9d8978cdbc7fc6ed34da177668c1a889 (MD5) Previous issue date: 2015-04-29 === CAPES === Alguns aracnídeos possuem uma ampla distribuição geográfica e podem viver mais de duas décadas; eles estão presentes desde a Era Paleozóica há cerca de 300 milhões de anos. Esses aracnídeos são as tarântulas, especificamente as aranhas pertencentes ao gênero Lasiodora. Infelizmente o gênero ainda encontra-se sob uma revisão sistemática e necessita de informações e compilações científicas de qualquer natureza. Com o intuito de enriquecer as informações sobre esse gênero a presente Tese descreve, pela primeira vez, a caracterização dos hemócitos de Lasiodora sp. quanto a ultraestrutura e a purificação de peptídeos antimicrobianos a partir dessas mesmas células. Adicionalmente, apresenta um artigo de revisão que tem como foco os hemócitos da Lasiodora sp. sob aspectos de purificação de biomoléculas, caracterização celular e situação taxonômica do gênero. Seis tipos celulares de hemócitos foram identificados e classificados de acordo com a literatura existente, nomeados prohemócitos, granulócitos tipo I e II, esferulócitos, oenocitóide e plasmatócitos. Quanto à purificação de peptídeos antimicrobianos (AMPs) as tarântulas: Lasiodora sp., Acanthoscurria rondoniae e Vitalius sorocabae, migalomorfas da família Theraphosidae, foram escolhidas para testar a hipótese de que moléculas podem ser conservadas em organismos do mesmo táxon. Os componentes antimicrobianos de Lasiodora sp. (L), A. rondoniae (A) e V. sorocabae (V) foram pré-purificados por cromatografia com concentrações crescentes de acetonitrila (5%, 40% e 80%). O material eluído na concentração de 40% de acetonitrila foi submetido a um fracionamento por cromatografia em fase reversa (RP- HPLC), resultando em frações com atividade antimicrobiana. Todas as frações isoladas foram analisadas quanto ao efeito no crescimento da bactéria Gram-positiva Micrococcus luteus A270, Gram-negativa Escherichia coli SBS363 e levedura Candida albicans MDM8. As frações L1, A1 e V1 inibiram o crescimento de E. coli, M. luteus e C. albicans. As frações L2, A2 e V2 apresentaram atividade antimicrobiana somente contra E. coli enquanto as frações L3, A3, e V3 apresentaram atividade antimicrobiana contra E. coli e C. albicans. Todas as frações isoladas foram submetidas à espectrometria de massas (ESI-MS). As frações L1, A1 e V1 correspondem ao peptídeo gomesina, as frações L2, A2 e V2 ao peptídeo migalina, e as frações L3, A3 e V3 ao peptídeo acanthoscurrina. O estudo contribui para a caracterização inédita do gênero e para a elucidação de biomoléculas em hemócitos de aranhas. === Some arachnids have a wide geographical distribution and can live more than two decades; they are present from the Paleozoic Era about 300 million years. These arachnids are tarantulas, specifically spiders belonging to Lasiodora genre. Unfortunately the genre still is under a systematic review and needs information and scientific compilations of any kind. In order to provide more details about this genre this thesis describes for the first time, the characterization of hemocytes Lasiodora sp. as the ultrastructure and purification of antimicrobial peptides from these same cells. Additionally, features a review article focuses on the hemocytes of Lasiodora sp. under aspects of purification of biomolecules, cell characterization and taxonomic situation. Six cell types of hemocytes were identified and classified according to the literature, named prohemocytes, granulocyte type I and II, spherulocytes, oenocytes and plasmatocytes. For the purification of antimicrobial peptides (AMPs) of tarantulas: Lasiodora sp., Acanthoscurria rondoniae and Vitalius sorocabae, mygalomorphs from Theraphosidae family, were chosen to test the hypothesis that molecules can be conserved in the same taxon. The antimicrobial components of Lasiodora sp. (L) A. rondoniae (A) and V. sorocabae (V) was pre-purified by chromatography with increasing concentrations of acetonitrile (5%, 40% and 80%). The material eluted at a concentration of 40% acetonitrile was subjected to fractionation by reversed phase chromatography (RP-HPLC), resulting in fractions with inhibitory activity. All the isolated fractions were analyzed for their effect on the growth of Gram-positive bacterium Micrococcus luteus A270, gram negative Escherichia coli and yeast Candida albicans SBS363 MDM8. The fractions L1, A1 and V1 inhibited the growth of E. coli, C. albicans and M. luteus. The L2 fractions, A2 and V2 showed antimicrobial activity against E. coli while only fractions L3, A3, and V3 showed antimicrobial activity against E. coli and C. albicans. All isolated fractions were subjected to mass spectrometry (ESI-MS). The fractions L1, A1 and V1 correspond to gomesin peptide fractions; the L2, A2 and V2 mygalin and L3, A3 and V3 the acanthoscurrin. The study contributes to the unprecedented characterization of the genus and the elucidation of biomolecules in hemocytes of spiders.