Histomorfometria e estereologia do gel do biopolímero do melaço da cana-de-açúcar implantado em bexiga de coelhos

• Main Author: RANGEL, Artur Eduardo de Oliveira
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/4447698450760237
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pernambuco 2018
• Subjects: Refluxo vesicoureteral; Incontinência urinária de esforço; Biocompatibilidade
• Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26637

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Artur Eduardo de Oliveira Rangel.pdf: 4239586 bytes, checksum: 52268fa84dd54fa644af5442a0959869 (MD5) Previous issue date: 2011-09-01 === Introdução: Até o presente não existe um produto que seja biocompatível, inabsorvível, de fácil manipulação, com custo benefício satisfatório para o implante endoscópico para tratamento do refluxo vesicoureteral e da incontinência urinária por insuficiência esfincteriana uretral. Objetivos: Analisar a resposta inflamatória, a biocompatibilidade, a estabilidade, quantificar a fibrose tecidual e a neoformação vascular no hospedeiro, do gel de biopolímero da cana-de-açúcar produzido pela Zooglea sp (BCA) e do dextranômero e ácido hialurônico Deflux® implantados em bexigas de coelhos. Método: Vinte coelhos, divididos em dois grupos de dez animais, receberam implantes na bexiga e foram submetidos à eutanásia após três dias e três meses. Cada animal recebeu dois implantes do Deflux® na metade anterior direita da bexiga, e dois implantes do biopolímero BCA na metade anterior esquerda da bexiga. Após a eutanásia dos animais e remoção da bexiga, um retângulo de tecido, medindo 1 x 1 cm, foi recortado em cada um dos implantes. Foram utilizadas técnicas histoquímicas de coloração Hematoxilina e Eosina para evidenciar infiltrados celulares e vasos sanguíneos, Resorcina-fucsina de Weigert com prévia oxidação com oxona (fibras do sistema elástico) e Tricrômico de Masson e Picro Sirius (colágeno). Tecnicas imunohistoquímicas de Avidina Biotina e o anti-corpo monoclonal anti-alfa actina para caracterização das células de músculo liso. Para a realização de controles negativos, o anticorpo primário foi substituído por PBS. A revelação da imunomarcação foi feita com solução de 3,3-diaminobenzidina tetrahidrocloreto. Resultados: O implante do Deflux® foi envolvido por uma cápsula fibrosa. O gel do Deflux® encontrava-se fragmentado em pequenas áreas, as quais eram homogêneas em sua organização e livres de células e vasos sanguíneos em seu interior. A suposição é que o implante do gel do Deflux® é um material imunologicamente inerte. O implante do gel do biopolímero da cana-de-açúcar, observou-se que o gel foi bem colonizado por matriz celular e vasos sanguíneos, um infiltrado inflamatório é visível em algumas áreas. Ainda, o implante foi envolvido por uma cápsula de fibrose. Diferentes áreas do gel do BCA mostram uma matriz fibrosa extracelular, embora sessões coradas pelo método tricrômico de Masson e Picro-Sirius sob luz polarizada, tenha mostrado uma pequena quantidade de colágeno, ou ausência do mesmo no gel do BCA. O gel foi metabolizado ou estava em metabolização pelas células. Por outro lado, existiam poucas áreas no total do implante, com o gel homogeneamente distribuído, quase toda sua extensão foi invadida por células ou vasos sanguíneos. Conclusão: Os achados sugerem que o biopolímero da cana-de-açúcar é biocompatível, integra-se ao tecido hospedeiro, permanecendo no local implantado. Sugerem que o gel induz um processo de remodelação e será substituído por tecido conjuntivo. A análise do terceiro grupo de animais após 12 meses do implante poderá confirmar a remodelação do implante com aumento do tecido residual, permitindo confirmar a estabilidade do implante no longo prazo. Esta pesquisa translacional visa o desenvolvimento de um novo produto para implante endoscópico para o tratamento do refluxo vesicoureteral e da incontinência urinária com custo/benefício favorável, possibilitando acesso às novas técnicas, usuários da rede pública de saúde. === Introduction: To date, no single ideal agent fulfills the requisites of being biocompatible, non-absorbable and easy to handle at a satisfactory cost-to-benefit ratio to be employed as an endoscopically injectable implant agent in the treatment of vesicoureteral reflux and urinary incontinence secondary to urethral sphincter insufficiency. Objectives: To evaluate the inflammatory response, biocompatibility and stability and to quantify fibrosis and neovascularization in host tissue after treatment with the sugarcane derived biopolymer gel manufactured by Zooglea sp (BCA) in comparison to dextranomers plus hyaluronic acid (Deflux®) as injection agents in rabbit urinary bladder implants. Methods: Twenty rabbits, divided into two groups of ten animals each, underwent urinary bladder implant placement and were euthanized at 3 days and 3 months post-implant. Each animal received two Deflux® implants in the right anterior half, and two BCA biopolymer implants in the left anterior half of the bladder. Histochemical staining was performed with hematoxillin and eosin (H&E) to reveal cellular infiltrates and blood vessels, Weigert’s resorcin fuchsin with oxon (elastic fibers) and Masson’s trichrome and picrosirius (collagen). Avidin-biotin Immunohistochemistry was performed with an anti-alpha actin primary antibody to characterize smooth muscle cells. Negative controls were performed with PBS used in place of the primary antibody. The reaction signal was developed with a 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) solution. Results: Deflux® implants were clearly involved by a fibrous capsule. The Deflux® gel was found to scatter into small homogeneously organized areas lacking cells and blood vessels. The assumption is that Deflux® gel is an immunologically inert material. BCA biopolymer implants were well colonized by cellular matrix and blood vessels and showed areas of clearly visible inflammatory infiltrates. Furthermore, the implants were completely involved by a fibrous capsule. The BCA gel itself presented two patterns of organization. Several areas showed a fibrous extracellular matrix on H&E stain. Examination of these areas with Masson’s trichrome and Picrosirius stain under polarized light revealed minimal to absent collagen within the BCA polymer. The gel had been or was in the process of being metabolized by the cells. On the other hand, a few areas within the implant showed homogeneous distribution of the gel which was almost entirely invaded by cells or blood vessels. Conclusion: These findings suggest that the BCA polymer has a favorable biocompatibility profile, it integrates into the host tissue and remains at the injection site. The histopathological data suggest that the BCA gel induces a remodeling process and is replaced by connective tissue. Analysis of a third animal group at 12 months post-implant could confirm remodeling with increase of residual tissue and would allow assessment of long term implant stability. This translational research effort aims at developing a novel material to be used in endoscopic implants with a more favorable biocompatibility profile and cost-benefit ratio. Ultimately, such agent would grant access to modern treatment modalities to low income patients and beneficiaries of the “Sistema Unico de Saude”.