Caracterização da acetilcolinesterase das brânquias e trato digestório da ostra Crassostrea rhizophorae do estuário Canal de Santa Cruz, PE-Brasil

• Main Author: SOUZA, Paula Rayane de
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/2205151409139871
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pernambuco 2018
• Subjects: Ostracódeo; Acetilcolinesterase; Metais pesados
• Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25614

Submitted by Pedro Barros ([e-mail]) on 2018-08-14T22:20:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Rayane de Souza.pdf: 1282150 bytes, checksum: 8f89b2ccd184812b4c0dd7f80e5658c4 (MD5) === Approved for entry into archive by Alice Araujo ([e-mail]) on 2018-08-16T18:38:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Rayane de Souza.pdf: 1282150 bytes, checksum: 8f89b2ccd184812b4c0dd7f80e5658c4 (MD5) === Made available in DSpace on 2018-08-16T18:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Rayane de Souza.pdf: 1282150 bytes, checksum: 8f89b2ccd184812b4c0dd7f80e5658c4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 === A ostra nativa é um fruto do mar bastante consumido e por ser um bivalve de hábito filtrador é considerado um excelente bioindicador ambiental. Assim, o presente trabalho tem o objetivo de caracterizar parcialmente parâmetros cinéticos e físico-químicos da acetilcolinesterase de brânquias e vísceras de Crassostrea rhizophorae do Canal de Santa Cruz, localizado em Itamaracá e investigar o efeito in vitro de pesticidas e íons metálicos sobre sua atividade a fim de investigar seu potencial como biomarcador dessas substâncias. Acetilcolinesterase é uma enzima do grupo das serino-esterases que atua na hidrólise do neurotransmissor acetilcolina garantindo a intermitência dos impulsos nervosos responsáveis pela comunicação neuronal. A inibição deste mecanismo ocorre devido aos efeitos da exposição a pesticidas organofosforados e carbamatos, bem como a íons metálicos e resulta em acúmulo de acetilcolina na fenda sináptica gerando uma hiper-estimulação colinérgica. Desta forma, ostras foram coletadas, brânquias e vísceras retiradas separadamente e feito os homogenatos em Tris-HCl 0,1M, pH 8,0. A partir destes homogenatos foram realizadas a determinação da atividade enzimática, temperatura ótima, estabilidade térmica, avaliação do efeito de inibidores específicos, pesticidas e o efeito de íons metálicos. Os resultados demonstraram que o pH ótimo foi de 8,0 e 8,5 para a enzima de brânquias e vísceras, respectivamente. Temperatura ótima de 70°C para AChE branquial e 75°C para AChE visceral. A enzima apresentou estabilidade térmica até 100°C em ambos tecidos. Os parâmetros cinéticos de Vmₐₓ em brânquias e vísceras foram de 18.169 ± 0.52 mU/mg e 12.139 ± 0.31 mU/mg, respectivamente. O valor de Km 0.502 ± 0.05 mM para as brânquias e 0.255 ± 0.04 mM para vísceras. Todos os pesticidas utilizados apresentaram efeito inibitório na atividade da AChE apresentando decréscimo significativo. Os íons Zn²⁺; Cu²⁺+; Hg²⁺; Mn²⁺ ; Ba²⁺ e Al²⁺ em 0,1 mM inibiram a atividade nos dois tecidos de estudo, brânquias em 79%, 88%, 73%, 100%, 77% e 100% . E para vísceras uma inibição de 85%, 100%, 41%, 65%, 100% e 59% respectivamente. A AChE isolada nas brânquias de C. rhizophorae mostrou potencial biomarcador para o carbamato carbaril, e o íon Cu²⁺. Esta enzima pode ser considerada uma ferramenta útil no monitoramento de toxicidade ambiental. === The native oyster is a sea fruit widely consumed and for being a strainer habit of bivalve is considered an excellent environmental bioindicator. Therefore, the aim for this study was partially characterize the kinetic parameters and physico-chemical of acetylcholinesterase gills and viscera of Crassostrea rhizophorae from the Canal Santa Cruz, Itamaracá and investigate the in vitro effect of pesticides and metallic ions on activity for investigate its potential as a biomarker of these substances. Acetylcholinesterase is an enzyme from the group of serine esterase which acts on the hydrolysis of the neurotransmitter acetylcholine ensuring the burst of nerve impulses responsible for neuronal communication. This inhibition mechanism is due to the effects of exposure to organophosphorus and carbamate pesticides, as well as metal ions and results in the accumulation of acetylcholine in the synaptic cleft generating a cholinergic overstimulation. Oysters were collected, gills and viscera removed separately and made homogenates with 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0. Homogenates were centrifuged and subsequently to carry out the enzymatic activities, experiments the optimum temperature, thermal stability, trials with specific inibidors, pesticides and the effect of metal ions. The results showed that the optimum pH was 8.0 and 8.5 for the enzyme gills and viscera, respectively. Optimum temperature of 70 ° C gill AChE and 75 ° C visceral AChE. The enzyme showed to be stable up to 100 ° C in both tissues. The kinetic parameters, Vmₐₓ gills and viscera was 18.169 ± 0.52 mU/mg e 12.139 ± 0.31 mU/mg respectively. The value of Km 0.502 ± 0.05 to the gills and 0.255 ± 0.04 mM for viscera. All pesticides used showed inhibitory effect on AChE activity presenting significant decrease. The ions íons Zn²⁺, Cu²⁺, Hg²⁺, Mn²⁺ Ba²⁺ and Al²⁺ 0.1 mM inhibited the activity in both tissue study, gills 79%, 88%, 73%, 100%, 77% and 100%. Viscera 85%, 100%, 41%, 65%, 100% and 59% respectively. The AChE gills of C. rhizophorae showed potential biomarker for carbaryl carbamate, and copper ion Cu²⁺, enzyme considered a useful tool in monitoring environmental toxicity.