Purificação e caracterização de uma lectina antimicrobiana da raiz de Portulaca elatior

• Main Author: SILVA, José Dayvid Ferreira da
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/2885145995086459
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Pernambuco 2018
• Subjects: Lectinas; Bactérias; Fungos
• Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/24417

Submitted by Alice Araujo ([e-mail]) on 2018-04-20T18:19:01Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) === Made available in DSpace on 2018-04-20T18:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 === CAPES === Plantas contêm lectinas, ligantes de carboidratos e proteínas hemaglutininantes, capazes de induzir respostas biológicas em células de plantas e animais. Portulaca elatior é uma planta tóxica para o gado e cabras. Este estudo identificou um tecido de P. elatior com atividade hemaglutinante (AH), isolado a lectina a partir dele e determinada às características da lectina isolada. Extratos de folhas, caule e raiz foram investigados e o extrato de raiz foi o único a apresentar HA, com isso foi selecionado para isolamento da lectina por cromatografia em coluna de quitina. A lectina de raiz de P. elatior (PeRoL) eluída da coluna de quitina apresentou peptídeos com 32 e 15 kDa na SDS-PAGE sob condições não redutoras e redutoras, respectivamente. A AH de PeRoL se manteve a 120ºC e numa faixa de pH de 4.0 a 8.0 e os íons Ca2+ e Mn2+ não estimularam a lectina. O dissacarídeo trealose foi o melhor carboidrato inibidor da AH. Ensaios revelaram que o extrato da raiz de P. elatior contêm trealose e apresentou uma AH de 4-1 e pós-purificado de 4096-1 enquanto o extrato tratado com trealase apresentou AH de 256-1. Estes resultados revelam que trealose é o inibidor endógeno da AH de PeRoL. PeRoL apresentou atividade bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (CMI 32,5 µg/mL), Enterococcus faecalis (CMI 8,1 µg/mL) e Staphylococcus aureus (CMI 4,06 µg/mL) e atividade fungicida contra Candida albicans (CMI e CMF 16,5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei e Candida tropicalis (CMI e CMF 15 µg/mL). O estudo demonstrou que a raiz de P. elatior contem PeRoL, um ligante de quitina e lectina antimicrobiana, bem como a trealose, o carboidrato inibidor de PeRoL. === Plants contain lectins, carbohydrate binding and hemagglutinin proteins, capable of induce biological responses in cells of plants and animals. Portulaca elatior is a plant toxic to cattle and goats. This study identified the P. elatior tissue with the best specific hemagglutinating activity (SHA), isolated the lectin from it and determined characteristics of isolated lectin. Leaf, stem and root extracts were investigated and the root extract, which was the one that presented HA, was selected to isolate lectin by chitin column chromatography. P. elatior root lectin (PeRoL) eluted from chitin column showed polypeptide bands with 32 and 15 kDa on SDS-PAGE under non-reducing and reducing conditions, respectively. The PeRoL HA was active at 120ºC and pH range from 4.0 to 8.0 and Ca2+ and Mn2+ did not affect its HA. The disaccharide threalose was the best carbohydrate inhibitor of HA. Assays revealed that the root extract containing threalose and showed HA 4-1 and post-purification 4096-1 while the root extract treated with threalase showed HA 256-1. These data revealed that trehalose is an endogenous inhibitor of PeRoL HA. PeRoL showed bacteriostatic activity against Pseudomonas aeruginosa (MIC 32.5 µg/mL), Enterococcus faecalis (MIC 8.1 µg/mL) and Staphylococcus aureus (MIC 4.06 µg/mL) and fungicide activity against Candida albicans (MIC and MFC 16.5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei and Candida tropicalis (MIC and MFC 15 µg/mL). The study demonstrated that root of P. elatior contain PeRoL, a chitin-binding and antimicrobial lectin as well as threalose, a carbohydrate inhibitor of PeRoL.