Produção de antígenos imunizantes em sistema de expressão procarioto para o desenvolvimento de estratégias profilático-terapêutica contra o Papilomavírus Humano

• Main Author: SILVA, Anna Jéssica Duarte
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/3473903684822728
• Language: br
• Published: Universidade Federal de Pernambuco 2017
• Subjects: HPV; Câncer Cervical; Vacina; Imunização; Expressão heteróloga; Cervical Cancer; Vaccine; Immunization; Heterologous expression
• Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/19540

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa ([e-mail]) on 2017-07-12T15:56:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Anna_Jessica_PPGG.pdf: 2035458 bytes, checksum: 6a4bc578c9eaea104302f33af03c3f21 (MD5) === Made available in DSpace on 2017-07-12T15:56:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Anna_Jessica_PPGG.pdf: 2035458 bytes, checksum: 6a4bc578c9eaea104302f33af03c3f21 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 === CNPQ === A infecção pelo Papilomavírus Humano, além de representar uma doença sexualmente transmissível altamente disseminada, é responsável por 5% dos cânceres em humanos, destacando o câncer cervical com altos índices de incidência e mortalidade. Embora comprovadamente eficazes, as vacinas vigentes não combatem infecções já estabelecidas e apresentam um elevado custo de produção. Esse cenário revela a necessidade de estratégias vacinais alternativas. O presente trabalho propõe a expressão de diferentes genes recombinantes em Escherichia coli, uma plataforma biotecnológica econômica, de fácil manipulação e de alto rendimento. Os genes recombinantes utilizados foram: L1 de HPV16 e construções quiméricas basedas na substituição de epítopos da oncoproteína E5 na alça h4 e na região C-terminal de L1, com potencial para geração de antígenos profiláticoterapêuticos e na substituição de epítopos da proteína L2 na região da alça h4 para avaliação de possível neutralização cruzada. Após subclonagem em pGEM-T, esses genes foram clonados em vetor de expressão pAE e linhagens de Escherichia coli BL21 e Rosetta foram transformadas com os vetores de expressão gerados. A confirmação da produção das proteínas se deu por Western blot, a partir de extratos de culturas induzidas com IPTG. Otimizações nos protocolos de indução, lise e preparo das amostras foram realizadas ao longo dos experimentos. Os resultados obtidos demonstraram a produção dos antígenos recombinantes, e deverão ser validados em futuros ensaios imunológicos quanto à capacidade de induzir respostas imunes em animais desafiados. === Human papillomavirus infection, besides to represent a widespread sexually transmitted disease, is responsible for 5% of cancers in humans, highlighting cervical cancer with high rates of incidence and mortality. Although proven effective, the existing vaccines do not eliminate infections already established and have a high cost of production. This scenario shows the need for alternative vaccine strategies. This study proposes the expression of different recombinant genes in Escherichia coli, an economic, easy handling and high performance biotechnology platform. Recombinant genes used were: L1 of HPV16 and chimeric basedas constructions in replacement E5 oncoprotein epitopes on h4 loop and L1 C-terminal region, with the potential to generate prophylactic-therapeutic antigens and replacing L2 protein epitopes in loop region h4 for evaluation of possible cross-neutralization. After subcloning in pGEM-T, these genes were cloned into vector pAE expression and Escherichia coli BL21 and Rosetta were transformed with the expression vectors generated. Confirmation of protein production was performed by Western blot from extracts of cultures induced with IPTG. Optimizations in the induction protocols, lysis and preparation of the samples were carried out throughout the experiments. The results demonstrated the production of recombinant antigens and should be validated in future immunological assays for the ability to induce immune responses in challenged animals.