| Summary: | Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T18:10:06Z
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DISSERTAÇÃO Elis Dionisio da Silva.pdf: 1632784 bytes, checksum: 0d3a3af1af4ee2e2fea17121f8199a1c (MD5) === Made available in DSpace on 2016-02-25T18:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2015-02-23 === CAPES === A coinfecção Leishmania - HIV/aids é considerada uma doença emergente, devido à sobreposição geográfica das duas infecções em várias regiões no mundo. Tem sido observado em pacientes coinfectados uma diversidade clínica importante, pobre eficácia aos tratamentos leishmanicidas convencionais, além da dificuldade de um diagnóstico preciso. O objetivo desse estudo foi avaliar o uso da PCR-RFLP para identificação das espécies de Leishmania em pacientes com HIV/aids, fornecendo dados que auxiliem na correta abordagem clínico terapêutica. Participaram do estudo pacientes com HIV/aids internados em três Hospitais de Referência para HIV/aids da Região Metropolitana do Recife - PE no período de junho/2013 a dezembro/2014 que assinaram o TCLE; 5 mL de sangue periférico foram coletados para a pesquisa de DNA. A amplificação desse DNA foi realizada pela PCR, que teve como alvo a região ITS-1, utilizando os primers LITSR e L5.8S. A identificação das espécies, nos casos de coinfecção, foi realizada nos produtos amplificados pelo ITS-1PCR por análise do polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) e confirmadas por sequenciamento e alinhamento no GenBank. Foi encontrado em 21 pacientes DNA de Leishmania, utilizando a PCR - ITS1. Desses 66,% eram do sexo masculino, com faixa etária predominante de 25 à 39 anos e 80,9% provenientes de áreas urbanas. A identificação das espécies, nos casos de coinfecção pela PCR- RFLP identificou a espécie L.infantum em 15 (71,4%) dos pacientes e o sequenciamento dos amplicons indentificou em 17 (80,9%) a mesma espécie. Esse estudo sugere que a análise por RFLP do alvo ITS-1 da Leishmania spp. possa auxiliar no diagnóstico e na abordagem clínico-terapêutica dos casos de coinfecção Leishmania - HIV/aids, visto que na coinfecção, a leishmaniose pode não se apresentar na sua forma clássica. A RFLP-PCR destaca-se por ser mais simples e de baixo custo, comparada às técnicas de escolha, como eletroforese de isoenzimas e tipagem de microssatélites multilocus. A confirmação dos seus resultados pela análise de sequenciamento e alinhamento indica que a RFLP-PCR é uma técnica segura para identificar L. infantum em pacientes com HIV/aids. O uso da PCR-RFLP na rotina nos serviços de saúde pode auxiliar no desenvolvimento de estratégias de prevenção, controle e na assistência médica prestada aos pacientes coinfectados. === Leishmania - HIV/AIDS coinfection is considered an emerging disease, due to the geographical overlap of the two infections in several regions in the world. It has been observed in patients coinfected an important clinical diversity, poor efficacy to conventional treatments antileishmanial, besides the difficulty of accurate diagnosis. The aim of this study was to evaluate the use of PCR-RFLP for identification of Leishmania species in patients with HIV / AIDS, providing data to assist in the correct clinical therapeutic approach. The study enrolled patients with HIV / AIDS admitted to three referral hospitals for HIV / AIDS in the Metropolitan Region of Recife - PE from June / 2013 to December / 2014 signed the informed consent form; 5 mL of peripheral blood were collected for the detection of DNA. Amplification of DNA was performed by PCR that targeted the ITS-1 region using the LITSR and L5.8S primers. The identification of species in cases of coinfection, the amplified products was performed by ITS1-PCR by analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis and confirmed by sequencing and alignment of the sequences in GenBank. It was found in 21 patients Leishmania DNA using ITS1-PCR. Of these 66% were male, with predominant age range 25 to 39 years and 80.9% in urban regions. Species identification in cases of co-infection by PCR-RFLP identified L.infantum species in 15 (71.4%) patients and the sequencing of amplicons indentificou in 17 (80.9%) the same species. This study suggests that RFLP analysis of the ITS-1 target of Leishmania spp. may assist in the diagnosis and clinical and therapeutic approach of cases of coinfection Leishmania - HIV / AIDS, whereas in coinfection, leishmaniasis can not stand in your way classic. The RFLP-PCR stands out due to its simplicity and low cost, compared to the choice of techniques such as electrophoresis of isoenzymes and microsatellite multilocus typing. Confirmation of results by sequence analysis and alignment indicates that the RFLP-PCR is a safe technique to identify L. infantum in patients with HIV /AIDS. The use of PCR-RFLP in the routine of health services can assist in developing strategies for prevention and control and medical assistance to co-infected patients.
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