Obtenção, caracterizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALAsup(959) até SERsup(1066)

• Main Author: ELIAS, CAROLINE C.
• Other Authors: Regina Affonso
• Format: Others
• Published: 2015
• Subjects: cardiovascular diseases; cardiovascular system; blood circulation; hypertension; enzyme inhibitors; enzyme activity; angiotensin; dna; escherichia coli; protein structure; molecular biology
• Online Access: http://repositorio.ipen.br:8080/xmlui/handle/123456789/25320

Submitted by Claudinei Pracidelli ([e-mail]) on 2015-12-17T09:13:12Z No. of bitstreams: 0 === Made available in DSpace on 2015-12-17T09:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 === A enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a conversão de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA somática (sECA) possui dois domínios homólogos (N e C) que têm 60% de identidade. Embora estas duas regiões tenham homologia grande, o sítio catalítico C-domínio exibe uma atividade três vezes maior do que o N-domínio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos já existentes. O objetivo deste estudo foi obter a região Ala959 até Ser1066 do Cdomínio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante à estrutura nativa. Nós amplificamos a sequência correspondente ao sítio catalítico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequência no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A proteína foi expressa na forma solúvel e a purificação foi feita em uma única etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a proteína pura. Análises estruturais por dicroísmo circular e fluorescência confirmaram que a proteína recombinante estava na conformação correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzimática e é inibida por lisinopril. === Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) === IPEN/D === Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP