Clonagem, expressão, purificação e caracterização estrutural da região AP-1 da oncoproteína Jun

• Main Author: SILVA, FLAVIO S.
• Other Authors: Regina Affonso
• Format: Others
• Published: 2014
• Subjects: proteins; apoptosis; cloning; purification; ribosomes; tumor cells; neoplasms; mass spectroscopy
• Online Access: http://repositorio.ipen.br:8080/xmlui/handle/123456789/11802

Submitted by Claudinei Pracidelli ([e-mail]) on 2014-11-10T11:41:14Z No. of bitstreams: 0 === Made available in DSpace on 2014-11-10T11:41:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 === A proteína jun é um dos principais integrantes do complexo AP-1 e está envolvido nos processos inflamatórios, diferenciação, apoptose e migração celular. Esta proteína pode formar homodímeros e heterodímeros por meio da dimerização que ocorre pelo sítio de sequências de leucinas. Existem evidências de que a proteína jun pode ser inibida pela proteína RPL10 mediante a ligação destas proteínas, no mesmo sítio de sequências de leucinas no núcleo celular, parando a progressão de tumores. O objetivo deste trabalho foi expressar, isolar e caracterizar a região de ligação das sequências de leucinas (região AP-1), para estudos posteriores de ligação com a proteína RPL10. O cDNA para proteína jun foi amplificado por PCR e clonado nos vetores de expressão pET 26b(+), pET 28a-c(+) e p1813 e expressa em E.coli BL21 (DE3). A proteína expressa em vetor pET28_AP1 foi eficientemente purificada pela técnica de cromatografia de afinidade a íons metálicos, por possuir uma sequência (poli)histidina que facilitou a purificação, apresentando um excelente grau de pureza. A identidade da proteína foi confirmada através de análise feita por western blotting e dot blotting e também por analise por espectrometria de massas. === Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) === IPEN/D === Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP