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Previous issue date: 2018-07-02 === Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq === Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira.
The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary
haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the
disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that
gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of
transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards
eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification
of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the
infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The
objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to
aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a
lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a
recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an
antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold,
murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG
(Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and
10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The
staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen
resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic
specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland
conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using
Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The
results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating
the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied
prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar
results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can
be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine
leptospirosis and as a marker of infection in rodents. === A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A
doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica
pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre
em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em
períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores
da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e
roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio
ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse
estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no
diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste
imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando
antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como
marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm
conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal
anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os
protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras
negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos
resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do
protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo
canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de
coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a
intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10
apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a
concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados
para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados
semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode
ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de
leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.
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