Isolamento de bactérias endofíticas e estabelecimento in vitro de diferentes genótipos

• Main Author: Faria, Paulo Roberto
• Other Authors: Sibov, Sérgio Tadeu
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Goiás 2015
• Subjects: Micropropagação; Diversidade bacteriana; Antibióticos; Micropropagation; Bacterial diversity; Antibiotics; GENETICA::GENETICA VEGETAL
• Online Access: http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/3903

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Paulo Roberto Faria - 2012.pdf: 1827212 bytes, checksum: 3a1276717070b5a5dcde3f3289329041 (MD5) Previous issue date: 2012-08-10 === In micropropagation, plant tissue fragments called explants are isolated aseptically, disinfected and cultured in culture medium. However, oxidation and contamination are the main problems in the initiation of the tissue culture plants. In order to initiate the establishment of in vitro methodologies for selected sugarcane varieties a series of decontaminating treatments were performed in shoot tips with different exposure times and concentrations of sodium hypochlorite, casugamicin, ethanol and mercuric chloride. There were no problems with oxidation in any treatment. The use of reagent concentrations and times tested showed not be phytotoxic. Treatment using longer times of exposure to casugamicin and sodium hypochlorite obtained the lowest levels of contamination by fungi and bacteria. However, bacterial contamination rates were high which indicates the necessity of using new procedures for the decontamination process. It is known that the sugarcane is associated with different endophytic bacteria. In order to better study these endophytic bacteria and their relationship with the host plant, promoted the isolation of bacteria in explants of five different varieties of sugarcane: RB98710, RB34068, RB034130, RB034120 and RB034041 to determinate of morphological and physiological characteristics. The thirteen isolates have diversity for morphological and biochemical staining and are characterized as gram-positive. All of them had a production capacity of plant growth factors, and after antimicrobial susceptibility testing, two antibiotics: Ciprofloxacin and Ceftazidime showed the greatest potential for controlling the growth of the isolates. With microbial contamination controlled, studies were conducted to evaluate the effect of growth regulators on in vitro multiplication of shoot tip culture and its roots in three sugarcane varieties: RB98710, RB034041 and RB034130. We used liquid MS medium containing BAP, KIN, NAA and GA3 in different combinations and concentrations. The results showed that, for the three varieties tested, MS medium with 0.2 mg.L-1 BAP and 0.1 mg L-1 KIN are most suitable for higher production of shoots and that the best rooting results were obtained in semi-solid ½ MS medium with 6% sucrose, 5.0 mg L-1 NAA and 0.2% activated charcoal. The plantlets were acclimatized and survivability under ex vitro conditions was 90%, three weeks after the transfer to the greenhouse. === Na micropropagação, fragmentos de tecidos vegetal chamados explantes são isolados, desinfetados e cultivados assepticamente em meio de cultura. Porém, a oxidação e a contaminação são os principais problemas no início do processo de cultura de tecidos de plantas. Com o objetivo de iniciar metodologias de estabelecimento in vitro de variedades selecionadas de cana-de-açúcar foram realizados tratamentos de descontaminação de ápices caulinares com diferentes tempos de exposição e concentrações de hipoclorito de sódio, casugamicina, etanol e bicloreto de mercúrio. Não houve problemas de oxidação em nenhum dos tratamentos. O uso dos reagentes nas concentrações e tempos testados não mostrou ser fitotóxico, no tratamento utilizando os maiores tempos de exposição à casugamicina e ao hipoclorito de sódio obteve os menores índices de contaminação por fungos e bactérias. Porém, os índices de contaminação bacteriana foram elevados, o que indica a necessidade de uso de novos procedimentos para o processo de descontaminação. Sabe-se que a cana-de-açúcar está associada a diferentes bactérias endofíticas. Com o objetivo de melhor estudar estas bactérias endofíticas e sua relação com a planta hospedeira, promoveu-se o isolamento de bactérias contaminantes de explantes de cinco diferentes variedades de cana-de-açúcar: RB98710, RB034068, RB034130, RB034120 e RB034041 visando à determinação de características morfológicas e fisiológicas. Os treze isolados obtidos possuem diversidade para características morfo-tintoriais e bioquímicas sendo caracterizados como bastonetes gram-positivos. Apresentaram capacidade de produção de fatores de crescimento vegetal e, após teste de sensibilidade a antimicrobianos, dois antibióticos: Ciprofloxacino e Ceftazidima apresentaram maior potencial de controle do crescimento dos isolados. Com as contaminações microbianas controladas, estudos foram realizados para avaliar o efeito de reguladores de crescimento na multiplicação in vitro de culturas de ápices caulinares e seu enraizamento em três variedades de cana: RB98710, RB034041 e RB034130. Utilizou-se meio MS líquido contendo BAP, KIN, ANA e GA3 em diferentes combinações e concentrações. Os resultados mostraram que, para as três variedades testadas, o meio MS com 0,2 mg.L-1 de BAP e 0,1 mg.L-1 de KIN são os mais apropriados para a maior produção de brotos e que os melhores resultados de enraizamento foram obtidos em meio ½ MS semissólido com 6% de sacarose, 5,0 mg.L-1 de ANA e 0,2% de carvão ativado. As plântulas foram aclimatizadas e a capacidade de sobrevivência sob condições ex vitro foi de 90%, três semanas após a transferência para a casa de vegetação.