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Previous issue date: 2015-11-27 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES === Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq === Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP === Introduction: Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor and the
sixth most common type of cancer. Liver cirrhosis (LC) and viral hepatitis are their
main risk factors. Injured tissues and development process tissues need new
blood vessels, i. e., angiogenic process, that initiates by means of vascular
endothelial growth factors secretion, that is translated by VEGFA gene and
regulated by non-coding RNA, miRNA, that consists of a single strand of
approximately 22 nucleotides and has the function of binding to mRNA strand, to
inhibit protein translation. Objectives: To quantify VEGFA gene expression and
17 miRNAs predicted as its regulator in HCC and liver cirrhosis; to assess VEGFA
gene expression in relation to miRNAs expression and quantify VEGFA protein
expression in HCC and liver cirrhosis tissues. Patients and methods: Sixteen
samples of HCC tissue, 23 samples of liver cirrhosis tissue and 12 samples of
normal liver tissue were collected. Total RNA and proteins were isolated by
mirVana PARIS kit. VEGFA gene mRNA quantification and 17 miRNAs predicted
as regulators expression was performed by real time quantitative PCR.
Customized plates, TaqMan miRNA custom plate, were used for miRNAs.
Statistical analysis was performed by one sample t test, Wilcoxon tests and
Mann-Whitney test. Results: VEGFA gene expression was found downregulated
in HCC and there is negative correlation between gene expression and
tumor extension. MicroRNA hsa-miR-637 has showed significance and was
down-regulated on samples (mean 0.2003, p=0.0004) in LC, whereas miRNAs
hsa-miR-15b (median 0.04015; p=0.0005), hsa-miR-125b (median 0.01876;
p=0.0005), hsa-miR-423 (median 0.02650; p=0.0005), hsa-miR-424 (median
0.00462; p=0.0156), hsa-miR-494 (median 0.00877; p=0.0010), hsa-miR-497 (median 0.04487; p=0.0005), hsa-miR-612 (median 0.00679; p=0.0039) and hsamiR-637
(median 0.00166; p=0.0039) are down-regulated in HCC. Conclusions:
VEGFA gene expression is down-regulated in HCC. MicroRNA hsa-miR-637 is
down-regulated in LC. MicroRNAs hsa-miR-15b, hsa-miR-125b, hsa-miR-423,
hsa-miR-424, hsa-miR-494, hsa-miR-497, hsa-miR-612 e hsa-miR-637 are
down-regulated in HCC. VEGFA protein expression is low in HCC, corroborating
to gene expression found in HCC. === Introdução: O Carcinoma hepatocelular (CHC) é o tipo de tumor primário do
fígado e o quinto tipo de câncer mais comum. A cirrose hepática (CH) e as
hepatites virais são seus principais fatores de risco. Tecidos lesionados e em
processo de crescimento necessitam de novos vasos sanguíneos, ou seja,
processo angiogênico, que é iniciado por meio da secreção de fatores de
crescimento endoteliais vasculares. Este é produzido a partir do gene VEGFA e
regulado por RNA não codificante, o microRNA, que é constituído por uma fita
simples de aproximadamente 22 nucleotídeos e tem a função de ligação ao
mRNA, para inibição da tradução de proteínas. Objetivos: Quantificar a
expressão do gene VEGFA e 17 miRNAs preditos como seus reguladores em
CHC e cirrose hepática; avaliar a expressão do gene VEGFA em relação à
expressão dos miRNAs e quantificar a expressão das proteínas VEGFA em CHC
e cirrose hepática. Casuística e métodos: Foram coletadas 16 amostras de
tecido de CHC, 23 amostras de tecido cirrose hepática e 12 amostras de tecido
hepático normal para controle. A extração de RNA e proteínas totais foi realizada
por meio do kit mirVana PARIS. A quantificação do mRNA do gene VEGFA e
dos 17 miRNAs selecionados preditos como reguladores do gene foi realizada
por meio da técnica de PCR quantitativa em tempo real. Para os miRNAs foram
utilizadas placas customizadas TaqMan miRNA custom plates. A análise
estatística foi realizada por teste t de uma amostra, teste de Wilcoxon e teste de
Mann-Whitney. Resultados: O gene VEGFA foi encontrado em expressão
diminuída em CHC e há correlação negativa entre a expressão e a extensão do
tumor. O miRNA hsa-miR-637 mostrou significância e sua expressão foi
encontrada diminuída nas amostras (média=0,2003, p=0,0004) em CH, enquanto que os miRNAs hsa-miR-15b (mediana 0,04015; p=0,0005), hsa-miR-
125b (mediana 0,01876; p=0,0005), hsa-miR-423 (mediana 0,02650; p=0,0005),
hsa-miR-424 (mediana 0,00462; p=0,0156), hsa-miR-494 (mediana 0,00877;
p=0,0010), hsa-miR-497 (mediana 0,04487; p=0,0005), hsa-miR-612 (mediana
0,00679; p=0,0039) e hsa-miR-637 (mediana 0,00166; p=0,0039) estão em
expressão diminuída em CHC. Conclusão: A expressão do gene VEGFA
encontra-se diminuída em CHC. O microRNA hsa-miR-637 encontra-se em
expressão diminuída em CH. Os miRNAs hsa-miR-15b, hsa-miR-125b, hsa-miR-
423, hsa-miR-424, hsa-miR-494, hsa-miR-497, hsa-miR-612 e hsa-miR-637
encontram-se em expressão diminuída em CHC. A expressão das proteínas
VEGFA está diminuída em carcinoma hepatocelular, corroborando com o
encontrado para a expressão gênica em CHC.
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