| Summary: | Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-10-05T11:24:23Z
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Previous issue date: 2005-09-30 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === O óleo essencial de noz-moscada (Myristica fragans), obtido por hidrodestilação (rendimento de 7,1%) e avaliado através de ensaio poison food (0,1; 0,3 e 0,5%) apresentou atividade antifúngica contra Aspergillus flavus, A. ochraceus, A. niger, A. glaucus, Fusarium oxysporum, F. semitectum, Colletotrichum musae e C. gloeosporioides. O óleo bruto foi fracionado por cromatografia em camada delgada preparativa (sílica gel), utilizando diclorometano:hexano (8:2, v/v) como solvente e apresentou cinco frações ao ser revelado sob luz ultravioleta. Foram feitos dois ensaios com as cinco frações. No primeiro experimento, através do ensaio TLC bioautography , verificou-se apenas uma fração com atividade antifúngica contra A. flavus e A. ochraceus, com fator de retenção (Rf) correspondente a 0,80; sendo constituída de dois compostos. Submeteu-se essa fração (1,2 g) à cromatografia líquida de alta eficiência preparativa em fase normal, coluna LC-Si e diclorometano:hexano (9:1, v/v), sendo os compostos safrol (30 mg) e miristicina (800 mg) isolados e identificados através de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear (1H e 13 C). A fração antifúngica e a miristicina isolada foram avaliadas através do ensaio poison food a 0,1% contra os mesmos fungos e não houve diferença significativa entre os resultados dos dois ensaios. Dessa forma, a atividade antifúngica do óleo essencial de noz-moscada contra A. flavus e A. ochraceus foi atribuída à miristicina. Não foram realizados ensaio poison food com o safrol purificado devido à sua pequena quantidade na fração ativa, comparada à da miristicina. As percentagens relativas (por cromatografia gasosa com detector de ionização em chama) no óleo bruto foram 26,6% de miristicina e 3,5% de safrol, respectivamente. Em um segundo experimento, as cinco frações foram avaliadas pela técnica poison food a 0,1% contra A. niger, A. glaucus, Fusarium oxysporum, F. semitectum, Colletotrichum musae e C. gloeosporioides. Todas as frações foram ativas. Os compostos do óleo essencial bruto e das cinco frações foram identificados por cromatografia gasosa através do índice de retenção de Kováts (KI), sendo identificados 28 compostos no óleo essencial, com eugenol, acetato de diidrocarvila, metileugenol, α-terpineol, safrol, acetato de bornila e acetato de geranila sendo identificados também através de padrões. Estes padrões e miristicina isolados foram submetidos ao ensaio poison food . Eugenol inibiu (100%) os seis fungos avaliados. Metileugenol, α-terpineol e miristicina também exibiram bons resultados, inibindo parcialmente o desenvolvimento dos fungos, sendo que α-terpineol inibiu 100% o crescimento de A. glaucus, A. niger, C. musae e F. semitectum; metileugenol inibiu 100% o crescimento de C. musae e A. glaucus e miristicina apresentou inibição média entre 73 e 88% para todos os fungos, com exceção de A. glaucus (27%). Elemicina foi isolada de uma das frações (fração 2, Rf = 0,46 e Wb = 0,7 cm) através de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa e identificada por ressonância magnética nuclear de hidrogênio 1 e carbono 13. === Nutmeg (Myristica fragans) essential oil obtained by hydro-distillation (yield 7.1%) was submitted to poison food assay (0.1; 0.3 and 0.5%). The crude oil presented antifungal activity against Aspergillus flavus, A. ochraceus, A. niger, A. glaucus, Fusarium oxysporum, F. semitectum, Colletotrichum musae and C. gloeosporioides. The crude oil was fractionated by preparative thin layer chromatography (silica-gel), using dicloromethane: hexane (8:2) as the solvent. Five fractions were observed on UV exposure. In the first experiment, only one fraction (Rf = 0.80 e Wb = 1.4 cm) presented antifungal activity against A. flavus and A. ochraceus with TLC bioautography assay. This fraction (1.2 g) was purified by normal phase preparative high performance liquid chromatography using dicloromethane: hexane (9:1) as the elution solvent. Two compounds, safrole (30 mg) and miristicine (800 mg) were isolated and identified using gas chromatography-mass spectrometry and nuclear magnetic resonance (1H and 13C). This isolated antifungal fraction and standard miristicine were evaluated by the poison food assay at 0.1% against the same fungi. Since no significant difference was found between the two assays, the antifungal activity of the oil was attributed to miristicine against A. flavus and A. ochraceus. The relative % of miristicine and safrole (gas chromatography with flame ionization detector) in the crude oil was 26.6% and 3.5%, respectively. In the second experiment, the five fractions were evaluated by the assay poison food against A. niger, A. glaucus, Fusarium oxysporum, F. semitectum, Colletotrichum musae and C. gloeosporioides, at a concentration of 0.1%. All fractions were active. The compounds of the crude essential oil and five fractions were identified by gas chromatography using Kováts Index (KI). Twenty-eight compounds were identified in the crude essential oil with eugenole, dihydrocarvyl acetate, methyl-eugenole, α-terpineol, safrole, bornyl acetate, and geranyl acetate being identified also with standards. These standards and isolated miristicine were submitted to the poison food assay. Eugenole inhibited (100%) the six fungi evaluated. Methyl-eugenole, α-terpineol and miristicine also showed good results, partially inhibiting the development of the fungi, α-terpineol inhibited 100% the growth of A. glaucus, A. niger, C. musae and F. semitectum; methyl-eugenole inhibited 100% the growth of C. musae and A. glaucus and miristicine presented medium inhibition between 73 and 88% for all fungi, except for A. glaucus (27%). In addition, elemicine was isolated from one of the fractions (fraction 2, Rf = 0.46 and Wb = 0.7 cm) using high performance liquid chromatography by reverse-phase and identified by nuclear magnetic resonance (1H and 13C).
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