Estabelecimento de um modelo celular para o estudo de hipertrofias cardíacas mediadas pela inflamação: o papel de peptídeos vasoativos na modulação de COX-2 e PTEN.

• Main Author: Silva, Walmir da
• Other Authors: Moraes, Karen Cristiane Martinez de
• Language: Portuguese
• Published: 2014
• Online Access: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/4126

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. === Submitted by Oliveira Flávia ([e-mail]) on 2014-12-09T18:22:26Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstabelecimentoModeloCelular.pdf: 1557594 bytes, checksum: ad35ec75526c4781f82227e5e5b23b4e (MD5) === Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho ([e-mail]) on 2014-12-09T20:52:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstabelecimentoModeloCelular.pdf: 1557594 bytes, checksum: ad35ec75526c4781f82227e5e5b23b4e (MD5) === Made available in DSpace on 2014-12-09T20:52:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstabelecimentoModeloCelular.pdf: 1557594 bytes, checksum: ad35ec75526c4781f82227e5e5b23b4e (MD5) Previous issue date: 2013 === Trabalhos recentes têm demonstrado a importância do Sistema Renina-Angiotensina (SRA) na modulação das hipertrofias cardíacas e atenção especial vem sendo dada aos peptídeos vasoativos, Angiotensina II (Ang II) e a Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)], devido aos seus efeitos antagônicos nas hipertrofias, além do envolvimento destes na modulação dos níveis da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2), importante na produção de Prostaglandina E2 (PGE2), que direta ou indiretamente está envolvida com a resposta hipertrófica cardíaca quando mediada pela inflamação. Outro importante elemento no desenvolvimento do processo inflamatório crônico é a proteína supressora tumoral PTEN. Em tumores, onde a inflamação crônica esta presente, alguns estudos correlacionam a diminuição dos níveis de PTEN com a modulação da proteína COX-2, entretanto esta correlação ainda é obscura. Assim, no presente estudo, considerando-se um paralelismo molecular existente entre o processo inflamatório tumoral e os mecanismos hipertróficos/ inflamatórios cardíacos nós focamos nos processos de co-regulação de PTEN e COX-2 em cultura de células cardíacas tratadas com os peptídeos vasoativos Ang II e Ang-(1-7), visando a caracterização de marcadores moleculares e um futuro desenvolvimento de fármacos. Nossos resultados mostraram que as concentrações utilizadas dos peptídeos vasoativos não foram citotóxicas para o nosso modelo de estudo. Frente aos tratamentos, a análise da expressão gênica realizada através de reações de polimerização em cadeia (PCR) focou-se nos genes Cox-2, Pten, fatores transcricionais, marcadores de hipertrofia, assim como outros elementos correlacionados ao nosso modelo de estudo. Paralelamente, as análises proteícas por Western blot, demonstraram uma possível correlação entre COX-2 e PTEN quando da utilização do peptídeo Ang II. Baseado nessa observação, procuramos ainda analisar um possível mecanismo de regulação pós-transcricional, pela análise da expressão miRNAs nas culturas cardíacas estimuladas com a Ang II. Em conjunto os resultados deste trabalho demonstram que há um possível mecanismo de corregulação entre COX-2 e PTEN, além do possível envolvimento dos miR-26a e miR-26b na regulação dos níveis de PTEN, mostrando que o modelo celular estabelecido é funcional pra estudo das hipertrofias cardíacas mediado pela inflamação e colaborará com as etapas subsequentes na caracterização de marcadores moleculares como potenciais alvos terapêuticos. ______________________________________________________________________________________________ === ABSTRACT: Recent studies have shown the importance of the Renin-Angiotensin System (RAS) in modulating cardiac hypertrophy and special attention is being given to vasoactive peptides, Angiotensin II (Ang II) and Angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7 )], due to its antagonistic effects on hypertrophy, in addition to their involvement in the modulation of the levels of the enzyme Cyclooxygenase-2 (COX-2), important in the production of Prostaglandin E2 (PGE2), which is directly or indirectly involved in the hypertrophic response when mediated cardiac inflammation. Another important element in the development of chronic inflammation is the tumor suppressor protein PTEN. In tumors where chronic inflammation is present, some studies correlated the decreased levels of PTEN protein with the modulation of COX-2; however, this correlation is still unclear. Thus, in this study, considering a parallel between the molecular inflammation and tumor mechanisms hypertrophic / inflammatory heart we focus on the processes of co-regulation of PTEN and COX-2 in cultured heart cells treated with vasoactive peptides Ang II and Ang-(1-7), aiming at the characterization of molecular markers and future drug development. Our results showed that the concentrations of vasoactive peptides used were not cytotoxic for our study model. Front to the treatment, the gene expression analysis performed by polymerase chain reaction (PCR) focussed on the Cox-2, Pten, transcriptional factors, markers of hypertrophy genes, as well as other elements related to our study design. Simultaneously, the protein analysis by Western blot demonstrated a correlation between COX-2 and PTEN as the use of the peptide Ang II. Based on this observation, we further analyze a possible mechanism of post-transcriptional regulation, the expression analysis of miRNAs in cardiac cultures stimulated with Ang II. Combining the results of this study demonstrate that there is a possible mechanism of co-regulation between COX-2 and PTEN, and the possible involvement of miR-26a and miR-26b in regulating levels of PTEN, showing that the cellular model is established to study functional of cardiac hypertrophy mediated by inflammation and collaborate with subsequent steps in the characterization of molecular markers as potential therapeutic targets.