Obtenção e regeneração de protoplastos e cariótipo eletroforético de fungos micorrízicos de orquídeas

• Main Author: Coelho, Irene da Silva
• Other Authors: Queiroz, Marisa Vieira de
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Viçosa 2017
• Subjects: Protoplastos; Cariotipo molecular; Fungos; Micorrizicos; Orquideas; Ciências Agrárias
• Online Access: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10698

Submitted by Nathália Faria da Silva ([e-mail]) on 2017-06-14T18:25:04Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 15350 bytes, checksum: dfb862c1ae844570018456c3a9ff28f4 (MD5) === Made available in DSpace on 2017-06-14T18:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 15350 bytes, checksum: dfb862c1ae844570018456c3a9ff28f4 (MD5) Previous issue date: 2005-02-14 === Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico === O objetivo deste trabalho foi padronizar as condições de obtenção e regeneração de protoplastos de Epulorhiza repens e Ceratorhiza sp. e determinar o cariótipo eletroforético de Ceratorhiza sp. Para o fungo Epulorhiza repens, a maior produção de protoplastos, 8,0 x 10 6 protoplastos/mL, foi obtida em KCl 0,6 M, na presença de 15 mg/mL de “Lysing Enzymes” e 0,5 g de micélio fúngico com 2 dias idade, após fragmentação em liquidificador. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 8,5 % quando sacarose 0,5 M foi utilizada como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 58,6 % eram uninucleados, 21,4 % binucleados e 20 % anucleados. Para o fungo Ceratorhiza sp., a maior produção de protoplastos, 4,0 x 10 7 protoplastos/mL, foi obtida em NaCl 0,6 M, na presença de 15 mg/mL de “Lysing Enzymes” e 15mg/mL de Glucanex, 0,5 g de micélio fúngico com 2 dias de idade, após fragmentação em liquidificador. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 6,7 % utilizando sacarose 0,5 M como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 61 % eram uninucleados, 24,6 % binucleados, 3,2 % trinucleados e 11,2 % anucleados. O cariótipo eletroforético do fungo Ceratorhiza sp. apresentou no mínimo, 3 cromossomos cujos tamanhos foram estimados em 4,6; 3,5 e 2,2 Mb. A maior intensidade da banda de 4,6 Mb sugere que esta possa estar representando dois cromossomos, sendo o tamanho do genoma estimado em pelo menos 14,9 Mb. O estabelecimento de protocolos otimizados para obtenção e regeneração de protoplastos dos fungos Epulorhiza repens e Ceratorhiza sp. é importante, permitindo o estabelecimento de técnicas de transformação genética, o isolamento de mutantes, a determinação de cariótipo eletroforético e o cruzamento de linhagens. O cariótipo de Ceratorhiza sp. é importante para a determinação do número e do tamanho dos cromossomos, para se estimar o tamanho do genoma e a localização de genes relacionados à formação de micorrizas. === This study was conducted in order to standardize the formation conditions and regeneration of Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp. protoplasts and also to determine the electrophoretic karyotype of Ceratorhiza sp. For Epulorhiza repens, the highest production of protoplasts, 8,0 x 10 6 protoplasts/mL, was obtained in KCl 0,6 M, with 15 mg/mL of “Lysing Enzymes” and 0,5 g of mycelium at 2 days, after fragmentation in the liquefier. The best regeneration frequency, 8,5 %, was achieved when sucrose 0,5 M was used as an osmotic stabilizer. From total protoplasts obtained, 58,6 % were uninucleate, 21,4 % binucleate and 20 % anucleate. For Ceratorhiza sp. the highest production of protoplasts, 4,0 x 10 7 protoplasts/mL, was obtained in NaCl 0,6 M, with 15 mg/mL of “Lysing Enzymes” and 15 mg/mL of Glucanex, and 0,5 g of mycelium at 2 days, after fragmentation in the liquefier. The best regeneration frequency, 6,7 %, was achieved when sucrose 0,5 M was used as an osmotic stabilizer, and from total protoplasts obtained, 61 % were uninucleate, 24,6 % binucleate, 3,2 % trinucleate and 11,2 % anucleated. The electrophoretic karyotype of Ceratorhiza sp. showed at least 3 chromosomes around 4,6; 3,5 and 2,2 ixMb. The highest intensity of the band 4,6 Mb suggests that it represents two chromosomes, and the genome height was estimated in, at least, 14,9 Mb. It is important to establish optimized protocols for obtaining and regenerating protoplasts of Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp. to allow the establishment of techniques of genetic transformation, mutant isolation, electrophoretic karyotype determination and crossings between strains. Ceratorhiza sp. karyotype is important to determine chromosomes number and height, to estimate genome height and gene localization related to mycorrhizas formation.