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Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) === Made available in DSpace on 2017-04-19T18:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro === Ministério da Ciência e Tecnologia (MTC/Pronex) === Ministério da Saúde do Brasil === INTRODUÇÃO: Clostridium difficile é um importante patógeno entérico e o agente
etiológico da diarreia associada ao C. difficile (CDAD). Pacientes com CDAD excretam uma
grande quantidade de células vegetativas e esporos em suas fezes, levando a contaminação do
ambiente hospitalar e propagação deste patógeno. Este fato pode ser explicado pela resistência
dos esporos a muitos desinfetantes utilizados na rotina de desinfecção hospitalar. O objetivo
deste estudo foi avaliar a atividade de desinfetantes hospitalares contra os esporos e células
vegetativas de C. difficile. Além disso, foram analisados os perfis de proteínas totais das
células vegetativas das cepas de C. difficile, tratadas com os mesmos desinfetantes.
MÉTODOS: Os agentes de limpeza hospitalar Virkon® (peroxigênio), Cloro-Rio® (agente
liberador de cloro ativo), Peresal® (peroxigênio), Riohex® (biguanida), e Cidex Opa®
(aldeído), comumente utilizados em hospitais brasileiros, foram testados contra os esporos das
cepas de C. difficile HU17- ribotipo 133 e SJ1-ribotipo 135, ambos ribotipos encontrados
exclusivamente no Brasil. A cepa hipervirulenta de C. difficile, BI/NAP1/027, foi utilizada
para comparação. Os testes foram realizados de acordo com o método padrão para teste da
atividade esporocida de desinfetantes dos Estados Unidos, ASTM E2414-05. Para a análise do
perfil de proteínas totais, as mesmas cepas de C. difficile, incluindo também a ATCC 9689,
foram crescidas na presença e na ausência de concentração subinibitória dos desinfetantes
citados e submetidas a eletroforese em gel de SDS-PAGE. RESULTADOS: Os agentes
Cloro-Rio® e Cidex Opa® eliminaram completamente os esporos de todas as cepas testadas,
enquanto o Riohex® não exibiu qualquer redução significante. Por outro lado, o Virkon®
reduziu significativamente a concentração de esporos para as cepas HU17-133 e
BI/NAP1/027, mas o mesmo não foi observado com a cepa SJ1-135. O agente Peresal®
eliminou completamente os esporos da cepa HU17-133, mas apenas reduziu a concentração
inicial dos esporos para as cepas C. difficile SJ1-135 e BI/NAP1/027. Os desinfetantes Cloro-
Rio® e Riohex® foram os que mais afetaram a expressão de proteínas em todas as cepas
avaliadas. CONCLUSÕES: Em conjunto, nossos resultados mostraram que o Cloro-Rio® e
Cidex Opa® foram os desinfetantes mais eficazes para eliminação dos esporos de C. difficile.
O estudo das proteínas afetadas pelos desinfetantes poderia ajudar a elucidar a resistência do C. difficile frente a alguns agentes de limpeza e criar novas alternativas para eliminar e/ou diminuir a contaminação do ambiente hospitalar por esta bactéria === Introduction: Clostridium difficile is an important enteric pathogen and the etiological
agent of C. difficile-associated diarrhea (CDAD). Patients with CDAD, excrete a large amount
of vegetative cells and spores in their stools, leading to contamination of the hospital
environment and spread of the pathogen. This fact can be explained by the resistance of
spores to many disinfectants used in hospital routine. The aim of this study was to evaluate
the activity of hospital disinfectants against C. difficile spores and vegetative cells.
Furthermore were analyzed the whole proteins profiles of the vegetative cells of these strains
treated with the same disinfectant. METHODS: The hospital cleaning agents Virkon®
(peroxygen), Cloro-Rio® (chlorine), Peresal® (peroxygen), Riohex® (biguanide), and Cidex
Opa® (aldehyde), usually used in Brazilian hospitals, were tested against C. difficile strains
spores HU17-ribotype 133 and SJ1-ribotype 135, both exclusively Brazilian.
BI/NAP1/ribotype 027 strain was also used for comparison. The tests were performed in
accordance with the standard method for testing the sporicidal activity of disinfectants of the
United States, ASTM E2414-05. For the analysis of whole proteins profile, the strains were
grown in the presence and absence of sub inhibitory concentrations of the disinfectants and
applied on SDS-PAGE gel. RESULTS: Cloro-Rio® and Cidex Opa® completely eliminated
spores of all strains tested, while Riohex® did not show any significant reduction. On the
other hand, Virkon® significantly reduced HU17 and BI/NAP1/027 spores, but the same was
not observed with SJ1 strain. The agent Peresal® completely eliminate the spores of strain
HU17-133, but only reduced the initial concentration of spores for strains SJ1-135 and
BI/NAP1/027. The disinfectants Cloro-Rio® and Riohex® were the most affected protein
expression in all strains evaluated. CONCLUSIONS: Taken together, our results show that
Cloro-Rio® and Cidex Opa® are the most remarkable agents for eliminating spores. The
study of proteins affected by the disinfectant might help to elucidate the resistance of C.
difficile against some cleaning agents and create new alternatives to eliminate and/or reduce
the contamination of the hospital by this bacterium
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