Análises Moleculares de Linhagens selvagens e mutantes de Pestalotiopsis spp. associadas a plantas e basidiomicetos da Amazônia Brasileira.

• Main Authors: Banhos, Elissandro Fonseca dos, 93-99160-6499
• Other Authors: [e-mail]
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Amazonas 2017
• Subjects: Fungos endofíticos; Pestalotiopsis; Bioatividade; Fungo Amazônico; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
• Online Access: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6065

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Were evaluated about their morphological diversity (conidia structure), genetic (Its1 and Its2 / AFLP), protein (SDS-PAGE) and they secondary metabolites were evaluated for chemical profile obtained by mass spectrometry (APCI-MS ). Secondary metabolites were tested against tumor cells SKMEL-19, CAL-27, ACP02 and against strain of C. albicans CFAM - 1342, associating the results with yours metabolomic profile. The most promising strain was subjected to mutagenesis by UV (UVC) light induction. The 33 strains of Pestalotiopsis spp. were isolated from nine plant genera as Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., Pinus sp., and associated Basidiomycetes. The most representative species were P. mangiferae, P. microspora and P. clavispora with eight, seven and six strain respectively. The extracts did not showed promising results against any of the tumor cells and nine extracts showed activity against C. Albicans. The chemical profile assessed over 60 days showed that the strain P. microspora (P12 / AnspCg1.1.3a) isolated of Rollinia sp. initiates the stationary growth phase of 20 days of cultivation, and the cultivation time best for obtaining bioactive compounds is 30 days. The analyzes of the reduction of the carbon source, growth of mycelial mass and the pH of the fortified protein profile results confirmed that the strain arrive the metabolic apex with 25 days.The production of mutant strains PX was efficient, but the strains did not show anticandida activity in their extracts. The secreted protein profile was also modified proteins of 50 to 140 kDa being expressed with greater intensity. Through large-scale cultivation was possible positive evaluation by bioautography and CCDP isolation subfractions which analyzed by 1H and 13C NMR showed the presence of 3-phenyl-propionic acid molecule known for its ecological role in protecting the host against plant pathogens. === Fungos do gênero Pestalotiopsis podem ser encontrados como parasitas ou endófitos, sendo bastante disseminados aos diversos habitats. A bioprospecção de Pestalotiopsis spp. têm demonstrado o potencial deste gênero na obtenção de compostos bioativos como anticancerígenos e antimicrobianos, isso por conta da diversidade de metabólitos secundários que são capazes de produzir. No trabalho ampliou-se o conhecimento a cerca da genômica, proteômica e metabolômica de linhagens de Pestalotiopsis isolados de ambientes Amazônicos. Foram reativadas 33 linhagens do gênero Pestalotiopsis da Coleção do LaBMicra da Universidade Federal do Amazonas - UFAM. Foram avaliadas com relação a sua diversidade morfológica (estrutura de conídios), genética (Its1 e Its2/AFLP), proteica (SDS-PAGE) e seus metabólitos secundários foram avaliados através do perfil químico obtido por espectrometria de massas (APCI-MS). Os metabólitos secundários foram ensaiados frente a células tumorais SKMEL-19, CAL-27, ACP02 e frente a cepa de C. albicans CFAM – 1342, associando os resultados ao perfil metabolômico. A linhagem mais promissora foi submetida a mutagênese por indução de luz ultravioleta (UVC). As 33 linhagens de Pestalotiopsis spp. foram isoladas de nove gêneros vegetais como Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., e Pinus sp., além de associadas a Basidiomycetes. As espécies mais representativas foram P. mangiferae, P. microspora e P. clavispora, com oito, sete e seis linhagens respectivamente. Os extratos das linhagens não apresentaram resultado promissor contra nenhuma das células tumorais e nove extratos apresentaram atividade frente a C. albicans. O perfil químico avaliado ao longo de 60 dias demonstrou que a linhagem P. microspora (P12/ AnspCg1.1.3a) isolada de Rollinia sp. chega a fase estacionária de crescimento com 20 dias de cultivo, e que o melhor tempo de cultivo para a obtenção dos compostos bioativos é 30 dias. As análises da redução da fonte de carbono, crescimento da massa micelial e pH do meio fortaleceram os resultados do perfil proteico confirmando que a linhagem chega ao ápice metabólico com 25 dias. A produção de linhagens PX mutantes foi eficiente, mas as linhagens não apresentaram atividade anticandida em seus extratos. O perfil de proteínas secretadas também foi modificado com proteínas de 50 a 140kDa sendo expressas com maior intensidade. Através do cultivo em larga escala foi possível a avaliação positiva por bioautografia e por CCDP o isolamento de subfrações que analisadas por RMN de 1H e 13C revelaram a presença do ácido 3-fenil-propanóico, molécula conhecida por sua função ecológica na proteção da planta hospedeira contra patógenos.