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Previous issue date: 2011-08-31 === Dermatophytes comprise a group of filamentous fungi of great interest on public health
because of their ability to parasitize keratinized tissues, such as skin, hair and nails, and for
their wide distribution in the world. As a consequence of this parasitism, an infectious process
of dermatophytosis is established, from which a variety of clinical manifestations can occur,
affecting people of both genders and all age groups. Laboratory methods for mycological
diagnosis do not always allow a clear an especific definition of the agent. In this study,
different strategies for extraction of DNA, and molecular typing by PCR-RFLP, of seven
dermatophyte species were assessed. Two target regions: ITS/rDNA and the topoisomerase II
gene were evaluated, by testing three PCR protocols and three restriction enzymes (DdeI,
HinfI, HaeIII). For the DNA extraction, the glass bead shaking technique for cell lysis,
followed by Gustincich (1991) based mehod for DNA separation, demonstrated more
advantages. Our results has demonstrated that the topoisomerase II gene is a suitable target
region for identification of the seven major pathogenic dermatophyte fungal species,
reinforcing previous studies, and pointed to a new PCR-RFLP protocol, which is based on a
PCR of this gene using dPsD2 primer, followed by digestion of PCR products with HaeIII
restriction enzyme. === Os dermatófitos compreendem um grupo de fungos filamentosos de grande interesse na área
da saúde, devido à sua capacidade de parasitar os tecidos queratinizados, como a pele, pêlos e
unhas, e à sua ampla distribuição no mundo. Como conseqüência desse parasitismo instala-se
um processo infeccioso de dermatofitose, a partir do qual pode ocorrer uma diversidade de
manifestações clínicas, acometendo pessoas de ambos os gêneros e de todos os grupos etários.
Os métodos laboratoriais para o diagnóstico micológico nem sempre permitem uma clara
definição do agente em nível de espécie. No presente estudo foram analisadas diferentes
estratégias para a extração de DNA e para a identificação molecular por PCR-RFLP das
principais espécies de dermatófitos. Duas regiões alvo, a região ITS/DNAr e o gene da
topoisomerase II foram analisadas, testando-se três protocolos de PCR e três enzimas de
restrição (DdeI, HinfI, HaeIII). Na extração do DNA, o método de lise utilizando pérolas de
vidro e a separação do DNA com base no método de Gustincich (1991) demonstrou
importantes vantagens. Nossos resultados demonstraram que o gene da topoisomerase II é
uma região alvo adequada para identificação das sete principais espécies de fungos
dermatófitos patogênicos, reforçando estudos anteriores, e apontaram para um novo protocolo
de RFLP-PCR, que se baseia em uma PCR desse gene utilizando o primer dPsD2, seguido da
digestão dos produtos obtidos com a enzima de restrição HaeIII.
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