Análise da resistência antimicrobiana em cepas de Pseudomonas aeruginosa isoladas em Unidades de Tratamento Intensivo em Manaus

• Main Author: Dini, Vanda Santana Queiroz
• Other Authors: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Amazonas 2017
• Subjects: Resistência antimicrobiana; Cassetes gênicos; Antimicrobianos; Infecções nosocomiais; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
• Online Access: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5579

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Vanda S. Q. Dini.pdf: 3327102 bytes, checksum: 159dd47f2d164189acf76615ebf5f409 (MD5) Previous issue date: 2016-10-04 === FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas === Introduction: Pseudomonas aeruginosa resistant to multiple antibiotics (MDR , multi-drugresistance and PDR , pan-drug-resistance ) is a frequent etiologic agent of nosocomial infections, mainly affecting immunocompromised patients, such as those admitted to the Intensive Care Unit (ICU). Objectives: (1) Detect P. aeruginosa resistant to multiple antimicrobials in patients, professionals and hospital environment; (2) Identify genetic factors that confer antibiotic resistance such as integrons, gene cassettes and genes encoding enzymes β-lactamases; and (3) Detect clonal groups among isolates MDR/PDR. Methods: Samples were collected samples from patients, professionals and structures in ICUs of Hospitals 28 de Agosto (HPS28), Francisca Mendes (HUFM) e João Lúcio Pereira Machado (HPSJL), which were isolated and identified strains of P. aeruginosa by classical and molecular microbiological methods (amplification and sequencing of the 16S rRNA gene); The antimicrobial resistance profile was determined by disk diffusion technique; The research groups was determined by clonal genetic similarity among isolates MDR/PDR by PFGE; The detection of genes that encode resistance (integrons, gene cassettes and β-lactamases enzymes) was performed by PCR and confirmed by RFLP and/or genetic sequencing. Results: The phenotypes MDR and PDR were detected, respectively, 13.3 % and 1.2 % of the isolates. In 32 (38.5%) were detected class integrons 1. Of these, three (3.6%) were also positive for integrons class intengrons 2. The presence of the isolates showed statistical correlation (P<0.05) with significant phenotypic resistance to the tested drugs. A high frequency of integrons contained no genetic cassette or carried only genes that encode resistance to aminoglycosides streptomycin and spectinomycin and trimethoprim. The β- lactamase showed the production of enzyme KPC -2 study (66,7%), VIM (8.3%) and OXA - 50 (100%) P. aeruginosa isolates MDR/PDR. Two clonal groups were detected among MDR/PDR isolates, indicating clonal intra and inter-hospital. Conclusion: The isolation of P. aeruginosa from hospitals studied shows that these pathogens, which can cause severe nosocomial infections, in particular MDR and PDR strains are spreading in a hospital environment. Moreover, it appears that the presence of genetic elements such as integrons, gene cassettes and genes encoding β-lactamases are correlated to the resistance fenótops these isolates and therefore potential genetic mechanisms that confer antimicrobial resistance. Nevertheless, further studies are needed to assess the contribution of other molecular mechanisms and the selective pressure exerted by antimicrobial agents that contribute to the development of these phenotypes. === Introdução: Pseudomonas aeruginosa resistente a múltiplos antimicrobianos (MDR, multidrug- resistance e PDR, pan-drug-resistance) é um agente etiológico frequente em infecções hospitalares, acometendo principalmente pacientes imunossuprimidos, tal como os internados em Unidade de Tratamento Intensivo (UTI). Objetivos: (1) Detectar P. aeruginosa resistente a múltiplos antimicrobianos em pacientes, profissionais e estruturas hospitalares; (2) identificar fatores genéticos que conferem resistência antimicrobiana, tais como integrons, cassetes gênicos e genes codificadores de enzimas β-lactamases; e (3) Detectar grupos clonais entre os isolados MDR/PDR. Metodologia: Foram realizadas coletas de amostras de pacientes, profissionais e estruturas de UTIs dos Hospitais 28 de Agosto (HPS28), Francisca Mendes (HUFM) e João Lúcio Pereira Machado (HPSJL), dos quais foram isoladas e identificadas cepas de P. aeruginosa por metodologia microbiológica clássica e molecular (amplificação e sequenciamento do gene 16s rRNA); O perfil de resistência aos antimicrobianos foi determinado pela técnica de disco-difusão; A pesquisa de grupos clonais foi determinada por similaridade genética entre os isolados MDR/PDR por PFGE; A detecção de genes que codificam resistência (integrons, cassetes gênicos e enzimas β-lactamases) foi realizada por PCR e confirmadas por RFLP e/ou sequenciamento genético. Resultados: Os fenótipos MDRs e PDR foram detectados em, respectivamente, 13,3% e 1,2% dos isolados estudados. Em 32 (38,5%) foram detectados integrons de classe 1. Destes, três (3,6%) também foram positivos para integrons de classe 2. A presença de intengrons nos isolados estudados demonstra correlação estatística (P<0,05) significativas com os fenótipos de resistência aos fármacos testados. Uma alta frequência de integrons não continha cassete gênico ou apenas carregava genes que codificavam resistência aos aminoglicosídeos estreptomicina e espectinomicina e ao trimetropin. A pesquisa de β-lactamases revelou a produção de enzimas KPC-2 (66,7%), VIM (8,3%) e OXA-50 (100%) por isolados de P. aeruginosa MDR/PDR. Dois grupos clonais foram detectados entre os isolados MDR/PDR estudados, indicando disseminação clonal inter e intrahospitalares. Conclusão: O isolamento de P. aeruginosa a partir dos hospitais estudados evidencia que esses patógenos, capazes de causar graves infecções nosocomiais, em especial, cepas MDR e PDR, estão se disseminando em ambiente hospitalar. Além disso, constata-se que a presença de elementos genéticos como integrons, cassetes gênicos e genes codificadores de β-lactamases estão correlacionadas aos fenótops de resistência nesses isolados, sendo, portanto, mecanismos genéticos potenciais capazes de conferir resistência antimicrobiana. Apesar disso, estudos futuros são necessários para avaliar a contribuição de outros mecanismos moleculares e a pressão seletiva exercida pelos antimicrobianos que contribuem para o desenvolvimento destes fenótipos.