Avaliação da qPCR para determinação de genes de Mycobacterium tuberculosis associados à resistência à Isoniazida e à Rifampicina em amostras de escarros de pacientes multibacilares com Tuberculose pulmonar

• Main Author: Neves, Suelen Ennes das
• Other Authors: Sadahiro, Aya
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Amazonas 2017
• Subjects: Tratamento da Tuberculose; Antimicrobianos; Epidemiologia da Tuberculose; Procedimentos Micobacteriológicos; CIÊNCIAS DA SAÚDE: FARMÁCIA
• Online Access: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5475

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2016-07-21 === FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas === Early detection of resistance to drugs used to treat tuberculosis (TB) from Mycobacterium tuberculosis isolates, represent a challenge to Tuberculosis Control Program (TCP), because most antimicrobial susceptibility testing needs bacillus isolation in growth medium. Molecular methods have greater possibilities for rapid determination of resistance, they aim to detect mutations in M. tuberculosis genes associated with antimicrobial resistance and have promising results for Isoniazid and Rifampin, which are the major drugs of basic therapeutic regimen for TB treatment. This study evaluated the performance of PCR assay in Real Time (qPCR), directly by sputum samples and cultivation of strains isolated from patients with pulmonary tuberculosis multibacillar from Polyclinic Cardoso Fontes. 171 samples were analyzed by qPCR, targeting genes: katG, inhA and rpoB and the results were compared using the Nitrate Reductase Method (MNR). The resistance frequency for the evaluated samples was 9.36 % for Isoniazid , 5.85% for Rifampin and 4.09 % for both drugs. The katG and rpoB genes were associated with resistance to Isoniazid (p = 0.0001, 95% CI 3.61 to 21.01) and to Rifampin (p = 0.0001, 95% CI 6.34 to 51.05), respectively . The inhA gene was not associated with resistance to Isoniazid. There was acceptable agreement between phenotypic assay, MNR, and qPCR (sputum samples) for mutation detection for katG genes (kappa index: 0.4097) and rpoB (kappa index: 0.4985). The selected genes katG and rpoB were associated with resistance to Isoniazid and Rifampacina respectively, although the qPCR has had underperformed the MNR in this study. However, the molecular tests continue as promising targets for achieving faster results. In this context , optimizations in molecular testing should be performed to allow faster and more reliable diagnostics for resistance to anti -TB drugs and thus provide an appropriate treatment for the patient and reduce the transmission of TB. === A detecção precoce de resistência aos medicamentos utilizados no tratamento da tuberculose (TB), a partir de isolados de Mycobacterium tuberculosis, representa um desafio aos Programas de Controle de Tuberculose (PCT), pois a maioria dos testes de sensibilidade aos antimicrobianos necessita do isolamento do bacilo em meio de cultivo. Os métodos moleculares apresentam maiores possibilidades de determinação rápida da resistência, eles visam detectar mutações em genes de M. tuberculosis associados à resistência aos antimicrobianos e possuem resultados promissores para Isoniazida e Rifampicina, que são os principais fármacos do esquema terapêutico básico de tratamento da TB. O presente estudo avaliou o desempenho do ensaio PCR em Tempo Real (qPCR), diretamente de amostras de escarro e de isolados de cultivo de pacientes com TB pulmonar multibacilares, oriundos da Policlínica Cardoso Fontes. Foram analisadas 171 amostras por qPCR, tendo como alvo os genes: katG, inhA e rpoB e os resultados comparados com o Método de Nitrato Redutase (MNR). A frequência de resistência para as amostras avaliadas foi de 9,36% para Isoniazida, 5,85% para Rifampicina e 4,09% para ambos os fármacos. Os genes katG e rpoB foram associados a resistência a Isoniazida (p=0,0001; IC95% 3,61 a 21,01) e a Rifampicina (p=0,0001; IC95% 6,34 a 51,05), respectivamente. O gene inhA não apresentou associação a resistência a Isoniazida. Houve concordância aceitável entre ensaio fenotípico, MNR, e o qPCR (de amostras de escarro) para a detecção da mutação para os genes katG (Índice kappa: 0,4097) e rpoB (Índice kappa: 0,4985). Os genes selecionados katG e rpoB foram associados a resistência a Isoniazida e Rifampacina respectivamente, embora a qPCR tenha tido um desempenho inferior ao MNR neste estudo. Todavia, os testes moleculares continuam como alvos promissores para obtenção de resultados mais rápidos. Neste contexto, otimizações nos testes moleculares devem ser realizadas, para permitir diagnósticos mais rápidos e confiáveis para resistência aos fármacos anti-TB e, desta forma, proporcionar um tratamento adequado ao paciente e reduzir a transmissão da TB.