Desenvolvimento de um sistema em fluxo lateral para o diagnóstico de malária causada por Plasmodium falciparum

• Main Author: Mariúba, Luis André Morais
• Other Authors: Nogueira, Paulo Afonso
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Amazonas 2016
• Subjects: Malária - Controle; Teste para diagnóstico rápido; Anticorpos monoclonais; Sistema em fluxo lateral; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
• Online Access: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5209

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central ([e-mail]) on 2016-09-20T13:09:53Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) === Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central ([e-mail]) on 2016-09-20T13:10:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) === Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central ([e-mail]) on 2016-09-20T13:10:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) === Made available in DSpace on 2016-09-20T13:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2010-09-10 === CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === Traditionally, confirmatory diagnosis of malaria is made by microscopic examination of blood. Therefore, the diagnosis of the disease may be complicated by the lack of people or equipment necessary to obtain a fast and reliable diagnosis, especially in areas of difficult access. For these and other reasons, rapid, practical and sensitive methods have been developed, such as immunochromatographic strips. Therefore, this work aimed to develop a lateral flow system for the diagnosis of malaria caused by Plasmodium falciparum. So, polyclonal and monoclonal antibodies against the protein HRP2 (Histidine rich protein 2) of Plasmodium falciparum were produced using a recombinant protein that it fused to a glutathione-S-transferase (rHRP2-GST, obtained in previous work). After hibridomas production, only 20 responded against the protein rHRP2-GST, and of these only four showed some react ivity against the native protein. The monoclonal antibody that reacted better on this last ELISA test and in an immunofluorescence was used on a lateral flow system standardized here. For this standardization, the system was first mounted in lateral flow competitive format followed by a sandwich system using polyclonal anti-rHRP2-GST. In assays using red blood cells parasitized by P. falciparum, positive results were obtained (detection of the infection in the immunochromatographic strip) using polyclonal antibodies. The system was stable within the test period, thus demonstrating that possibly in a controlled product ion environment, this lateral flow system could remain stable for a time suitable for marketing === Tradicionalmente, o diagnóstico confirmatório da malária é feito pelo exame microscópico do sangue. Logo, o diagnóstico da doença pode ser complicado com a falta de pessoas ou equipamentos necessários para a obtenção de um diagnóstico confiável e rápido. Por esta e outras razões, métodos rápidos, práticos e sensíveis vêm sendo desenvolvidos, como, por exemplo, as fitas imunocromatográficas. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema em fluxo lateral para o diagnóstico de malária causada por Plasmodium falciparum. Logo, anticorpos policlonais e monoclonais contra a proteína HRP2 (“Histidine rich protein 2”) de Plasmodium falciparum foram produzidos utilizando para isso uma proteína recombinante desta fusionada a uma cauda de glutationa-S-transferase (rHRP2-GST, obtida em trabalhos anteriores). Após a obtenção dos hibridomas, apenas 20 responderam contra a proteína rHRP2-GST, e dentre estes apenas 4 apresentaram alguma reatividade contra a proteína nativa. O anticorpo monoclonal que melhor reagiu a este ultimo ELISA e em um ensaio de imunofluorescencia foi utilizado em um sistema de fluxo lateral padronizado nesta tese. Para esta padronização, foi montado primeiramente um sistema em fluxo lateral em formato competitivo seguido de um sistema em sanduíche utilizando anticorpos policlonais anti-rHRP-GST. Nos ensaios utilizando hemácias parasitadas por P. falciparum, foram obtidos resultados positivos (detecção da infecção na fita imunocromatográfica) usando os anticorpos policlonais. O sistema apresentou estabi l idade dentro do período de teste, demonstrando assim que possivelmente, em um ambiente de produção controlado, este sistema em fluxo lateral poderia permanecer estável por um tempo satisfatório para sua comercialização.