Mutações sinônimas e não sinônimas como um dos mecanismos de geração de polimorfismo do antígeno msp1 de plasmodium vivax

• Main Author: Evangelista, Janaína de Araújo
• Other Authors: Nogueira, Paulo Afonso
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Amazonas 2015
• Subjects: Plasmodium vivax; Mutações sinônimas; Mutações não sinônimas; Diversidade genética; Gene MSP1; Sinonymous mutations; Non-synonymous mutations; Genetic diversity; MSP1 gene; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
• Online Access: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/2249

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janaina de Araujo Evangelista.pdf: 5258011 bytes, checksum: f25739b96a1b2d123d21c1753b3204e8 (MD5) Previous issue date: 2011-05-06 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === subtropical regions of the planet. In North America, Plasmodium vivax is responsible for the most part of the infections. In 2011, 250,498 cases of malaria fever were studied; 80% of these cases were caused by Plasmodium vivax. The purpose of this study was to investigate the diversity generation of the gene MSP1 from Plasmodium vivax through the analisys of a specific mutation in the region from the block 2 genetic precombination events. In order to identify the existing mutations in multiclonal infections and generation of diversity in PvMSP1 a series of experiments were done, respectively, the extraction of genomic DNA of the parasite, PCR (polymerase chain reaction) using specific primers for the block 2, ligation of the fragment to cloning vector (top), processing using Escherichia coli competent cells, selection of colonies belonging to the same sample, DNA sequencing and analysis of synonymous and nonsynonymous mutations as their location in the prediction of B and T cell epitopes (not synonymous). The calculation of genetic distance between recombinant clones of the same sample by the MEGA 4.0 program confirmed the multiclonality of samples. The alignment of amino acid sequences showed the presence of genetic recombination events using DNASP program. DNA sequences obtained showed another interesting result: several synonymous and non-synonymous mutations in a relatively small stretch of DNA. Genetic diversity showed most mutations are not synonymous, and that most of them were located in regions referred to as B and T cell epitopes by BcPred and ProPred. So, as expected, the genetic diversity based on synonymous mutations and not synonymous possible sustains the phenomenon of escape on the immunity of the host. The characterization of these polymorphisms may contribute to immunological studies aiming at the development of a vaccine against malaria on stages caused by p. vivax. === A malária é um problema da saúde pública amplamente distribuída nas regiões tropicais e subtropicais do globo. No continente americano, o Plasmodium vivax é responsável por maior parte das infecções. No ano de 2011, 250.498 casos de malária foram observados no estado do Amazonas; 80% destes casos foram causados por Plasmodium vivax. O objetivo desse trabalho foi Investigar a geração de diversidade do gene MSP1 de Plasmodium vivax através da análise de mutações pontuais na região do bloco 2, eventos de precombinação genética. Para identificar as mutações existentes nas infecções multiclonais e geração de diversidade em PvMSP1 realizou-se uma série de experimentos, respectivamente, a extração de DNA genômico do parasita, PCR (Reação da Polimerase em Cadeia) utilizando primers específicos para o bloco 2, ligação do fragmento ao vetor de clonagem ( TOPO), transformação utilizando células de E.coli competentes , seleção de colônias pertencentes a uma mesma amostra, seqüenciamento de DNA e análise das mutações não sinônimas e sinônimas quanto sua localização em regiões de predição de epítopos de células B e T (não sinônimas). O cálculo da distância genética entre clones recombinantes de uma mesma amostra pelo programa MEGA 4.0 confirmou a multiclonalidade das amostras. O alinhamento das sequências de aminoácidos mostrou a presenção de eventos de recombinação genética utilizando o programa DNASP. As sequências de DNA obtidas demonstrou outro resultado interessante: várias mutações sinônimas e não sinônimas num trecho relativamente pequeno de DNA. A diversidade genética mostrou mais mutações não sinônimas, sendo que maior parte delas estavam localizadas em regiões previstas como epítopos das células B e T pelo programa BcPred e ProPred. Assim, como esperado, a diversidade genética baseado nas mutações sinônimas e não sinônimas sustenta o fenômeno de escape sobre a imunidade do hospedeiro. A caracterização desses polimorfismos poderá contribuir para estudos imunológicos visando o desenvolvimento de uma vacina contra os estágios eritrocitários da malária causada por P.vivax.