Efeitos da disfunção renal na cicatrização de anastomoses colônicas : estudo experimental em ratos Wistar

• Main Author: Silva, Carlos Eduardo da
• Other Authors: Repka, João Carlos Domingues
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: 2018
• Subjects: Cirurgia
• Online Access: http://hdl.handle.net/1884/52616

Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias === Co-orientador: Prof. Dr. João Carlos Domingues Repka === Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 10/03/2017 === Inclui referências : f.61-66 === Resumo: A doença renal crônica (DRC) atinge mais de 500 milhões de pessoas em todo o mundo e no Brasil existem mais de 2 milhões de portadores de algum grau de disfunção renal. Neste contexto as toxinas urêmicas geradas na DRC estão relacionadas ao comprometimento da cicatrização tecidual, pelo retardo do processo inflamatório cicatricial, baixa proliferação de fibroblastos e células endoteliais, baixos níveis teciduais de hidroxiprolina e colágeno, tecido conectivo subcutâneo e tecido de granulação. Os objetivos do presente estudo são avaliar na cicatrização de anastomoses colônicas de ratos urêmicos, a formação de tecido de granulação, a maturação de colágeno, a densidade microvascular e de miofibroblastos, a viabilidade celular cicatricial e os parâmetros séricos uréia, creatinina e proteína C reativa (PCR). Utilizaram-se 20 ratos Wistar, com idades entre 143 a 152 dias e pesos de 249,02 ± 13,80 gramas separados aleatoriamente em dois grupos. No grupo simulação os ratos foram submetidos à simulação da nefrectomia 5/6 pela incisão lombar esquerda exposição e manipulação do rim esquerdo (D0), incisão lombar direita, exposição e manipulação do rim direito (D7), laparotomia mediana, colotomia e colorrafia (D14). No grupo uremia, os ratos foram submetidos à nefrectomia 5/6 pela ressecção ambos os polos renais do rim esquerdo (D0), nefrectomia total do rim do rim direito (D7), laparotomia mediana, colotomia e colorrafia (D14). O estudo foi interrompido no sétimo dia após colotomia/colorrafia e coletaram-se amostras de sangue para dosagens séricas de uréia, creatinina e PCR e ressecaram-se os segmentos colônicos incisados e rafiados para processamentos histológicos e histoquímicos através da coloração de hematoxilina eosina para avaliação do tecido de granulação considerando a intensidade da reação inflamatória cicatricial, crosta fibrinoleucocitária, proliferação angiofibroblástica e reepitelização das bordas. Empregou-se a histometria computadorizada para as avaliações de colágenos tipo I e III pela coloração de picrosirius, densidade microvascular pela marcação com anticorpo monoclonal anti-CD34, viabilidade celular pela pesquisa do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e a densidade de miofibroblastos com anticorpo monoclonal anti-?-actina. Empregaram-se os testes de ANOVA e T-Student com p<0,05 para as comparações entre os grupos. O grupo de ratos submetidos à nefrectomia 5/6, em comparação ao grupo simulação, demonstraram aumentos da uréia sérica (p<0,0000) e proteína c reativa ultrassensível (p=0,0142), redução da: formação de tecido de granulação (reepitelização de bordas -p=0,0196, proliferação angiofibroblástica - p=0,0379), porcentagens de colágeno I (p=0,0009) e colágeno III (p=0,016), densidade microvascular (p=0,0074), PCNA (p<0,0000) e miofibroblastos (p<0,0001). A uremia experimental induzida pelo modelo de nefrectomia 5/6 determina impacto negativo no processo de cicatrização colônica quando avaliado por formação de tecido de granulação, maturação de colágeno, densidade microvascular, proliferação celular e densidade de miofibroblastos. DESCRITORES: Nefrectomia. Uremia. Proteína C reativa. Cicatrização. Cólon. Colágeno. Neovascularização Fisiológica. Miofibroblastos. Ratos Wistar. === Abstract: Chronic kidney disease (CKD) affects more than 500 million people worldwide and in Brazil there are more than two million patients with some degree of renal dysfunction. In this context, the uremic toxins present in patients with CKD are related to worsening in tissue healing by delaying the inflammatory process, decreasing the tissular levels of fibroblasts and endothelial cell proliferation, decreasing the tissular levels of hydroxyproline and collagen, subcutaneous connective and granulation tissue. Our aims are evaluate in uremic rats, the intestinal healing granulation tissue formation, collagen maturation, microvascular and myofibroblasts density, cicatricial cell viability and quantify the serum levels of urea, creatinine and C-reactive protein (CRP). Twenty Wistar rats, aged 143 to 152 days, weighing 249,02 ± 13,80 grams were randomly separated into two groups. In the sham group rats were submitted to 5/6 nephrectomy simulation by left lumbar incision, left kidney exposure and manipulation (D0), right lumbar incision, right kidney exposure and manipulation (D7), median laparotomy, colotomy and colorraphy (D14). In the uremia group, rats were submitted to 5/6 nephrectomy by the resection of both left renal poles (D0), total nephrectomy of the right kidney (D7) and median laparotomy, colotomy and colorraphy (D14). The study was discontinued on the seventh day and blood samples were collected for serum urea, creatinine and CRP dosages and the incised and sutured colonic segments were resected. The resected samples were studied histologically by hematoxylin eosin stain for evaluation of granulation tissue. The intensity of the cicatricial inflammatory reaction, fibrinoleucocytic crust, angiofibroblastic proliferation and borders reepithelialization were considered. Through histochemical processing, microvascular density was evaluated by anti- CD34 monoclonal antibody marking, cell viability by cell proliferation nuclear antigen (PCNA) screening and myofibroblasts density with monoclonal anti-?-actin antibody. Computerized histometry was used for evaluations of collagens type I and III by the coloration of picrosirius. The ANOVA and Student T tests were used with p <0.05 for comparisons between the groups. The group submitted to nephrectomy 5/6, compared to the sham group, urea increase (p <0.0000) and higher ultra-sensitive C reactive protein (p=0,0142). Decrease of granulation tissue formation (border repithelialization - p=0,0196), angiofibroblast proliferation p=0.0379), mean collagen I (p=0,0009) and collagen III (p=0,016), microvascular density (p=0,0074), PCNA (p<0,0000) and myofibroblasts (p<0,0001). The experimental uremia induced by nephrectomy 5/6 model establishes negative impact in the wound healing at large intestine when evaluated by granulation tissue formation and collagen maturation, microvascular and myofibroblastic cell densities, and cell viability. KEYWORDS: Nephrectomy. Uremia. C-reactive protein. Wound Healing. Colon. Collagen. Neovascularization, Physiologic. Myofibroblasts. Rats, Wistar.