Perfil fenotípico e genotípico de resistencia a antimicrobianos em patógenos bacterianos em animais de companhia

• Main Author: Sfaciotte, Ricardo Antonio Pilegi
• Other Authors: Osaki, Silvia Cristina
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: 2015
• Subjects: Teses; Ciência Animal
• Online Access: http://hdl.handle.net/1884/37106

Orientadora: Profª Drª Silvia Cristina Osaki === C-orientadora: Profª Drª Sheila Rezler Wosiacki === Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 02/09/2014 === Inclui referências === Área de concentração : Saúde animal === Resumo: A resistência antimicrobiana, condição ao qual um micro-organismo é capaz de sobreviver à exposição a um agente antimicrobiano, é um problema complexo que envolve várias espécies de bactérias, mecanismos de resistências, mecanismos de transferência e reservatórios. Em animais de companhia, os antimicrobianos são usados na prevenção e no tratamento de doenças infecciosas. O grande uso destes agentes, e muitas vezes de forma incorreta, na rotina veterinária tornam os cães e gatos uma potencial fonte de difusão de resistência antimicrobiana devido ao contato muito próximo desses animais com o homem, podendo levar à transmissão de bactérias multirresistentes e zoonóticas, além da transferência indireta de genes de resistência entre bactérias presentes na microbiota humana e animal. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar estirpes bacterianas em amostras obtidas de infecções clínicas e cirúrgicas de cães e gatos na medicina veterinária, investigando a presença de características fenotípicas e genotípicas de resistência a drogas antimicrobianas. Foram realizados três estudos distintos. No primeiro, patógenos bacterianos de 77 infecções caninas foram isolados, identificados e avaliados fenotipicamente para resistência antibacteriana. Foi possível identificar 100 isolados bacterianos sendo 61 Gram positivoss, com 55 Staphylococcus spp., e 39 Gram negativos (36 fermentadores e três não fermentadores). 73 isolados foram considerados multirresistentes pela avaliação individual das drogas e 74 pela avaliação das classes. Apenas cinco isolados mostraram-se sensíveis a todas as drogas. Dois isolados foram resistentes a todas as classes, sendo isoladamente, sensíveis a alguns antimicrobianos. Das 55 amostras de Staphylococcus spp., 36 (65,45%) foram identificadas como MRS, fenotipicamente, 80,56% (29/36) indicam a presença do gene mecA, 5,56% (2/36) do gene mecC e 13,89% (5/36) como hiperprodutoras de beta-lactamase. Dois isolados de Enterococcus spp. foram considerados resistentes a vancomicina (VRE). 61,54% (24/39) das amostras foram positivas no teste presuntivo para detecção de ESBL. No segundo estudo foram avaliados 26 isolados bacterianos provenientes de 18 afecções oftálmicas de animais de companhia. Foram caracterizados 18 Staphylococcus spp., um Enterococcus spp., e sete Gram negativos (seis fermentadores e dois não fermentadores). Um total de 738 avaliações de drogas antimicrobianas foram realizadas, onde o percentual de drogas consideradas resistentes ou com resistência intermediária in vitro foi de 42,82% (n=316). Considerando as drogas antimicrobianas isoladas, 18 isolados mostraram-se multirresistentes, enquanto que pela avaliação da resistência às classes, 20 isolados foram considerados multirresistentes. A detecção fenotípica de MRS mostrou 61,11% (11/18) dos isolados de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina, enquanto que a detecção genotípica, 38,89% (7/18) foram carreadores do gene mecA. Foram detectados isolados multirresistentes de MRS, MRS-MLSb e ESBL. No terceiro estudo, 80 isolados de Staphylococcus spp. coagulase positivos, identificados como S. pseudointermedius, foram avaliados pela disco-difusão com oxacilina e cefoxitina e amplificação por PCR de um fragmento do gene mecA, para caracterização de estirpes de MRS. 2285 avaliações de drogas antimicrobianas foram realizadas, onde 931 (40,74%) dos teste apresentaram resistência parcial ou total. Na detecção fenotípica de MRS, 58,75% (47/80) dos isolados apresentaram resistência à oxacilina e 53,75% (43/80) à cefoxitina. Na detecção genotípica, o gene mecA foi encontrado em 23 (28,75%) dos isolados. Avaliando-se a os isolados MRS e MSS, amostras mecA positivas e negativas com resistência a oxacilina e/ou cefoxitina, apresentaram tanto o MAR quanto o MCAR superiores aos isolados sensíveis a oxacilina/cefoxitina, sendo a detecção fenotípica mais sensível no quesito resistência múltipla a antimicrobianos ou classes. Os resultados para todos os antimicrobianos testados mostraram-se bastante homogêneo para amostras MRS detectadas de forma fenotípica, porém não para a detecção genotípica, no entanto, apesar da presença do gene, este pode não estar sendo expresso fenotipicamente. Os resultados do presente trabalho demonstram a necessidade do monitoramento constante do perfil de resistência bacteriana, que varia ao longo dos anos e difere de local para local. A realização de testes para identificação bacteriana e sua suscetibilidade podem auxiliar na seleção apropriada do agente antimicrobiano, mostrando-se essencial para a clínica médica e cirúrgica devido a altas taxas de resistência bacteriana verificadas, assim como o monitoramento da resistência local com o uso contínuo de determinadas drogas antimicrobianas. Palavras-chave: antibióticos, micro-organismos, multirresistência, susceptibilidade === Abstract: Antimicrobial resistance, a condition to which a microorganism is able to survive exposure to an antimicrobial agent, is a complex problem involving several species of bacteria, mechanisms of resistance, mechanisms of transfer and reservoirs. In companion animals, the antimicrobial agents are used in the prevention and treatment of infectious diseases. The widespread use of these agents, and often incorrectly, in veterinary routine make dogs and cats a potential source of spread of antimicrobial resistance due to the close contact of these animals with man, can lead to the transmission of multiresistant bacteria and zoonotic, addition to the indirect transfer of resistance genes between bacteria in human and animal microbiota. The aim of this study was to isolate and identify bacterial strains in samples obtained from clinical and surgical infections of dogs and cats in veterinary medicine, investigating the presence of phenotypic and genotypic characteristics of resistance to antimicrobial drugs. Three separate studies were conducted. In the first, 77 bacterial pathogens of canine infections were isolated, identified and evaluated phenotypically for antibacterial resistance. It was possible to identify 100 bacterial isolates whom 61 gram positive, with 55 Staphylococcus spp., and 39 gram negative (36 fermenters and three non-fermenters). 73 multiresistant isolates were considered by individual assessment of drugs and 74 of the evaluation of classes. Only five isolates were susceptible to all drugs. Two isolates were resistant to all classes, being alone, sensitive to some antibiotics. Of the 55 strains of Staphylococcus spp., 36 (65.45%) were identified as MRS, phenotypically, 80.56% (29/36) indicate the presence of the mecA gene, 5.56% (2/36) of the mecC gene and 13.89% (5/36) as a hyper-producing beta-lactamase. Two isolates of Enterococcus spp. were resistant to vancomycin (VRE). 61.54% (24/39) of samples were positive in the presumptive test for ESBL detection. In the second study evaluated 26 bacterial isolates from 18 ophthalmic diseases of pet animals. Were characterized 18 Staphylococcus spp., one Enterococcus spp., and seven gram negative (six fermenters and two non-fermenters). A total of 738 reviews of antimicrobial drugs were conducted where the percentage of drug found resistant or intermediately resistant strains in vitro was 42.82% (n = 316). Considering the isolated antimicrobial drugs, 18 isolates showed multiresistant, while the evaluation of resistance to classes, 20 isolates were considered multiresistant. Phenotypic detection of MRS showed 61.11% (11/18) isolates of Staphylococcus spp. methicillin-resistant, whereas the genotypic detection 38.89% (7/18) were carrying the mecA gene. multiresistant isolates were detected MRS, MRS and ESBL-MLSB. In the third study, 80 Staphylococcus spp. coagulase positive, identified as S. pseudintermedius were evaluated by disk diffusion oxacillin and cefoxitin and PCR amplification of a fragment of the mecA gene, for the characterization of strains MRS. 2285 reviews of antimicrobial drugs were conducted, where 931 (40.74%) of the test showed partial or total resistance. In phenotypic detection of MRS, 58.75% (47/80) of the isolates were resistant to oxacillin and 53.75% (43/80) to cefoxitin. In genotypic detection, the mecA gene was found in 23 (28.75%) isolates. Evaluating the MRS and the MSS isolated, positive and negative samples with resistance to oxacillin and / or cefoxitin mecA showed both the MAR and MCAR higher sensitive to oxacillin / cefoxitin isolated, being the most sensitive phenotypic detection in the question multiple resistance antimicrobials or classes. The results for all antibiotics tested were quite homogeneous samples to MRS detected phenotypic form but not for the genotypic detection, however, despite the presence of the gene, it might not being phenotypically expressed. The results of this study demonstrate the need for constant monitoring of bacterial resistance profile that varies over the years and differs from place to place. The testing for bacterial identification and susceptibility can assist in your selection of the appropriate antimicrobial agent, being essential for the medical and surgical due to high rates of bacterial resistance observed, as well as monitoring of local resistance to the continued use of certain antimicrobials. Keywords: antibiotics, micro-organisms, multidrug resistance, susceptibility