Influência do Receptor Extracelular Sensível a Cálcio (CaR) sobre a atividade das H* - ATPases renais

• Main Author: Casare, Fernando Augusto Malavazzi
• Other Authors: Perez, Ricardo Fernandez
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: 2011
• Subjects: Teses
• Online Access: http://hdl.handle.net/1884/26286

Resumo: Os rins são órgãos importantes na manutenção da homeostase hidro-eletrolítica e na regulação do equilíbrio ácido-base. Nos últimos anos estudos demonstraram que o receptor extracelular sensível à Ca2+ (CaR) está presente em diversos segmentos do néfron, desde o túbulo proximal ao ducto coletor, assim como em outros órgãos. O número de estudos relacionados a esses receptores vêm demonstrando que o mesmo está relacionado ao controle da homeostase mineral e regulação na secreção de hormônios calciotróficos clássicos, como: o PTH, a Calcitonina e 1,25(OH)2 D3, assim como no controle da secreção gástrica. Resultados recentes sugerem que o cálcio extracelular modula a secreção de prótons independente de Na+ em células intercalares do ducto coletor cortical e medular externo em camundongos. O objetivo geral deste projeto foi investigar a interação do CaR com o transporte de prótons através da H+-ATPase do tipo vacuolar (H+-ATPasev) e da H+/K+-ATPase presentes no rim de camundongo. A determinação bioquímica da atividade destas H+-ATPases foi realizada utilizando frações parcialmente purificadas de membrana plasmática de córtex e medula externa de rim de camundongo, obtidas seguindo um protocolo modificado a partir do empregado por Boumendil-Podevin (1983) e Caruso-Neves (1999). O fosfato liberado na reação foi quantificado através de reação colorimétrica adaptada da metodologia descrita por Fiske e Subbarow. Este método baseia-se em cálculos envolvendo a diferença entre o Pi liberado na ausência e na presença de inibidores específicos das H+-ATPases, Bafilomicina 10-7M e Concanamicina 10-8M para H+-ATPasev e Schering 28080 10- 5M e Orto-Vanadato 10-3M para H+/K+-ATPase. A atividade ATPásica é expressa em nmol Pi.mg-1.min-1. A atividade da H+-ATPasev, tanto da região cortical quanto medular externa, foi estimulada de forma significativa ao incrementar a concentração extracelular de Ca2+, apresentando uma resposta dose-dependente. Assim como para a H+-ATPase, a atividade da H+/K+-ATPase do tipo gástrico também demostrou-se sensível às alterações da concentração de Ca2+ o. Quando o CaR foi estimulado pelos agonistas Gd3+ 3x10-4M ou Neomicina 2x10-4M também ocorreu estímulo na atividade das H+-ATPases, tanto na região cortical quanto na região medular externa. Na região cortical a atividade da H+-ATPasev foi também estimulada de forma significativa por Angiotensina II 10-9M, sendo que o estímulo do CaR na presença da Angiotensina potencializou significativamente o efeito sobre a atividade da H+-ATPasev, sugerindo interação nas vias de sinalização intracelular envolvidas. Estes resultados nos permitem concluir que o CaR atua na secreção de prótons pelos túbulos renais, estimulando a atividade da H+-ATPasev e da isoforma gástrica da H+/K+-ATPase localizadas na membrana plasmática dos segmentos tubulares da região cortical e medular externa do rim de camundongos.