Estudo da imunogenicidade das proteínas SAG1, SAG2 e SAG3 de Toxoplasma gondii expressas em vírus recombinantes e mapeamento de seus epítopos protetores

• Main Author: Erica Araujo Mendes
• Other Authors: Ricardo Tostes Gazzinelli
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2010
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8BNPFP

=== The tachyzoite SAG proteins are involved in activation of protective immune responses against the parasite T. gondii in infected individuals. In the present study, we have evaluated the activation of humoral and cellular immunity in mice vaccinated with recombinant adenoviruses coding for SAG1, SAG2 or SAG3 from T. gondii. Peptides corresponding to MHCI-binding epitopes, specific for the H2-Db and H2-Ld haplotype, were predicted in SAG1, SAG2 and SAG3 proteins by sequence analysis on SYFPEITHI software. Those peptides were produced by solid-phase synthesis employing the Fmoc methodology. BALB/c and C57BL/6 mice received two 109 p.f.u. doses of AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 or AdCTRL, six weeks apart. Serum samples obtained from C57BL/6, four weeks after the last immunization, were submitted to Western-blot assays, against total tachyzoite lysate (TLA). Two to four weeks after the last immunization, spleens from both mice lineages were collected for ELISPOT assays. Splenocytes were stimulated in vitro with synthetic peptides corresponding to epitopes predicted on SYFPEITHI software. Vaccinated mice were challenged with an oral dose ME49 strain two weeks after the last immunization. Results show that immunization elicited specific IgG antibodies against the three proteins in C57BL/6 mice. Also, immunization with AdSAG1 induced specific activation of IFN-g producing CD8+ T cells in both mice. Those cells showed to be responsive to an epitope predicted on SAG1 sequence. The same level of activation was not observed in mice from the AdSAG2, AdSAG3 or AdCTRL groups. Further, the immune responses observed in AdSAG1-vaccinated mice were related to protection against an oral challenge with the ME49 strain. It was observed higher survival rate and less cysts numbers in that group. These results indicate that vaccination with recombinant viruses is feasible approach for development of anti-toxoplasma vaccines. === As proteínas de superfície (SAGs) presentes em taquizoitos de T. gondii encontram-se envolvidas na ativação de resposta imune contra o parasita. No presente estudo nós avaliamos a capacidade de adenovírus recombinantes codificando os genes de SAG1, SAG2 e SAG3 em induzir a ativação de resposta imune humoral e celular, além de imunidade protetora contra cepa cistogênica do parasita. A ativação de resposta imune humoral foi avaliada em camundongos C57BL/6 vacinados com adenovírus recombinantes (AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCtrl) e a resposta imune celular foi avaliada tanto em BALB/c (resistentes) quanto em C57BL/6 (susceptíveis) à cepa ME49 de T. gondii. Peptídeos correspondentes a epítopos MHCI-restritos, específicos para os haplótipos H2-Db e H2-Ld, foram determinados para cada proteína, através da análise de seqüência no programa SYFPEITHI. Tais peptídeos foram produzidos por meio de síntese em fase sólida, de acordo com a metodologia Fmoc. Camundongos BALB/c e C57BL/6 receberam duas doses de 109 p.f.u. de AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCTRL, com intervalo de seis semanas. Amostras de soro obtidas dos animais C57BL/6 quatro semanas após a última imunização foram submetidas a Western-blot contra lisado total de taquizoítos (TLA). Os resultados demonstraram que a imunização gerou anticorpos IgG específicos contra as três proteínas nesses animais. Duas a quatro semanas após a última imunização, esplenócitos de ambas as linhagens de camundongos foram coletados para ensaios de ELISPOT. Os esplenócitos foram reestimulados in vitro com os peptídeos sintéticos identificados no programa SYFPEITHI. A imunização com AdSAG1 levou a ativação de células T CD8+ produtoras de IFN-g em ambas as linhagens. Estas células se mostraram responsivas a um epítopo previamente identificado na seqüência da proteína SAG1. Camundongos C57BL/6 vacinados foram desafiados com a cepa ME49 duas semanas após o término do protocolo de imunização. Consistente com a capacidade de induzir ativação de resposta imune celular foi observada proteção parcial em camundongos C57BL/6 vacinados com AdSAG1, os quais apresentaram maior taxa de sobrevivência e menor número de cistos cerebrais se comparado ao grupo controle.