Viabilidade in vitro de espermatozóides ovinos criopreservados em meios contendo lipoproteínas de baixa densidade nas formas natural ou liofilizada

• Main Author: Valeria Spyridion Moustacas
• Other Authors: Marc Roger Jean Marie Henry
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2009
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SSLA-83GPVA

=== The aim of the present work was to evaluate the efficiency of the addition of natural and lyophilized low density lipoproteins (LDL) instead of egg yolk to ram semen extender during cryopreservation. Two ejaculates from 10 rams were collected and sperm motility, mass motility, vigor, number, reactivity to the hypoosmotic swelling test and morphology were evaluated. Ejaculates presenting sperm motility 70%, vigor 3 and sperm pathologies 30% were frozen. Ejaculates were distributed in 9 treatments: (T1) 16% egg yolk -Tris (control), (T2-T5) Tris - 8, 12, 16 and 20% of natural LDL, respectively, (T6-T9) Tris - 8, 12, 16 and 20% of lyophilized LDL, respectively. Samples were ressuspended to 100x106 sperm/ mL and packaged into 0.25mL straw, cooled to 5°C during three hours, and frozen in liquid nitrogen. Sperm total and progressive motility, and kinetic were analyzed using computadorized analyses system (CASA). Percentage of spermatozoa with functional integrity of plasma membrane was assessed by the hypoosmotic swelling test (HOST), sperm membrane physical integrity with Propidium Iodide (PI) and acrosome integrity with FITC-PSA using an epifluorescent microscope. There was no difference of sperm characteristics evaluated among different concentrations of natural LDL and egg yolk added to the extenders (P>0.05): total motility (T1: 20.9 ± 11.9 and T2-T5: 25.9 ± 13.6 %), progressive motility (T1: 6.6 ± 4.2 and T2-T5: 11.7 ± 7.5 %), HOST+ (T1: 23.7 ± 6.9 and T2-T5: 23.2 ± 8.7 %) and PI-/PSA- (T1: 13.8 ± 7.8 and T2-T5: 18.1 ± 7.8 %). Nevertheless, LDL lyophilization process was unable to preserve function of lipoproteins, since the sperm parameters evaluated showed lower values (P>0.05) compared to natural LDL and control groups === Objetivou-se avaliar a eficácia da substituição da gema de ovo por diferentes concentrações de lipoproteínas de baixa densidade (LBD) nas formas fresca e liofilizada, durante o processo de criopreservação do sêmen ovino. Para tal, foram utilizados 10 carneiros, sendo coletados dois ejaculados por animal. Após a coleta foram avaliados a motilidade, o movimento de massa, o vigor, a concentração, a reatividade ao teste hiposmótico e a morfologia espermática. Para o congelamento foram utilizados somente ejaculados que apresentaram motilidade mínima de 70%, vigor 3 (0-5) e máximo de 30% de patologias espermáticas. Cada ejaculado foi fracionado em nove diferentes diluidores, sendo o meio base Tris-16% de gema (controle) e os demais consistiram na substituição da gema de ovo por 8, 12, 16 e 20% de LBD natural e liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100x106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25mL. Após o congelamento/descongelamento foram avaliadas a motilidade total, progressiva e os parâmetros de cinética espermática com auxílio do sistema computadorizado (CASA), além do teste hiposmótico. Foram avaliadas a integridade de membranas plasmática e acrossomal, bem como a morfologia e a longevidade espermática. O delineamento experimental adotado foi o de blocos ao acaso, sendo cada bloco representado por um animal. A análise estatística foi realizada com auxílio do programa estatístico SAS (Statistical Analyses System), sendo as médias comparadas pelo teste múltiplo de Duncan. Para todas as características avaliadas, o uso das diferentes concentrações de lipoproteínas de baixa densidade fresca promoveu resultados similares (P>0,05) aos encontrados com o meio contendo gema de ovo. Os meios contendo lipoproteínas liofilizadas promoveram respostas significativamente inferiores (P<0,05) aos demais tratamentos em todos os parâmetros avaliados. Os resultados permitem concluir que as lipoproteínas de baixa densidade frescas são capazes de proteger as células espermáticas durante a criopreservação da mesma forma que a gema de ovo. No entanto, os processos de liofilização e ressuspensão não foram capazes de preservar as características funcionais das lipoproteínas, visto que os valores dos parâmetros espermáticos avaliados foram inferiores aos demais tratamentos que continham gema de ovo ou lipoproteína fresca