Desenvolvimento de PCR espécie-específico para o diagnóstico da infecção por Brucella ovis e avaliação comparativa de métodos sorológicos

• Main Author: Mariana Noyma Xavier
• Other Authors: Renato de Lima Santos
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2009
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SSLA-7YSH6J

=== The goal of this study was to develop a PCR test targeting specific B. ovis genomic sequences tobe applied in biological samples from rams and to evaluate three serological tests, AGID usingtwo antigens and CF, available in for the diagnosis of ovine brucellosis. Specific primer pairswere designed targeting 12 open reading frames (ORF). Blood, serum, semen, urine, preputialwash, and organs samples were collected from experimentally infected rams through 180 dayspost infection. Moreover, biological samples from eight rams belonging to B. ovis-free flock aswell as 40 semen samples from rams belonging to naturally infected flocks were obtained. Thelimit of detection of this PCR protocol was 102, 10¹,100 CFU/mL for semen, urine and prepucialwash samples, respectively. Similar sensibility and specificity values were obtained by this PCRmethod when compared to bacteriology using the biological samples. Both ID test presentedsimilar sensitivity and specificity values and, both methods were statistically more efficient thanCF test for the serological diagnosis of B. ovis infection. The results clearly indicate that thisfirst specific PCR method is highly efficient for the diagnosis of B. ovis infection in biologicalsamples from infected rams. Additionally, ID should be used, rather than CF, for the serologicaldiagnosis of this disease with the antigens evaluated === O presente estudo objetiva desenvolver um método diagnóstico espécie-específico para a infecção por Brucella ovis baseado em PCR e avaliar três testes sorológicos disponíveis, a IDGA utilizando 2 antígenos e a FC, para o diagnóstico desta enfermidade. Foram utilizadas 12 janelas de leitura (ORF) como sequências-alvo de amplificação. Amostras de soro, sangue, sêmen, urina, lavado prepucial e órgãos de 9 carneiros experimentalmente infectados foramobtidas ao longo de 180 dias de infecção. Adicionalmente, amostras biológicas de 8 animais provenientes de rebanho livre da doença, além de 40 amostras de sêmen provenientes de rebanhos naturalmente infectados foram obtidas. O método de PCR apresentou limite de detecção de 102, 10¹,100 UFC/mL em amostras de sêmen, urina e lavado prepucial, respectivamente. Valores semelhantes de sensibilidade e especificidade foram encontrados para o método de PCR quando comparado ao isolamento bacteriano para as amostras testadas. As IDGAs apresentaram valores de sensibilidade e especificidade semelhantes entre si e estatisticamente superiores à FC. Os resultados indicam que primeiro método de PCR espécieespecífico demonstrou ser eficiente para o diagnóstico da infecção por B. ovis em amostras biológicas de caniros infectados. Além disso, a IDGA deve ser preferida à FC para o diagnóstico desta enfermidade com os antígenos avaliados.