Elisa indireto com proteinas recombinantes para diagnóstico da infecção por Brucella ovis em carneiros

• Main Author: Silvia de Araujo Franca
• Other Authors: Renato de Lima Santos
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2014
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9SGH6T

=== Brucella ovis is a major cause of epididymitis in sexually mature rams, resulting in subfertility, infertility, and economic losses for the sheep industry worldwide. The aim of this study was to develop an indirect ELISA (iELISA) using recombinant proteins, namely rBoP59 or rBP26, as antigens for serological diagnosis of B. ovis infection. rBoP59 and rBP26 were purified by affinity chromatography and antigenicity of these was tested by Western blot and iELISA. The tests of repeatability and reproducibility were performed with 500 ng and 1 g of BoP59r or BP26r per well, testing serum from negative and positive rams in AGID, bacteriology and PCR from urine samples, being performed 10 separate repetitions. BoP59r did not discriminate negative from positive, but BP26r was effective in distinguishing positive from negative ram serum samples. The ELISAi with BP26r using sera from rams experimentally infected with B. ovis had the highest performance with serum dilution of 1:20, with 100% sensitivity, 90.2% specificity, positive predictive value (PPV) of 93.2%, negative predictive value (NPV) of 100%, and accuracy of 1.0. For serum samples that had been positive by AGID, best results were obtained from the serum dilution at 1:40, the sensitivity was 85.7%, specificity 85.4%, PPV of 75%, VPN of 92.1% and accuracy was 0.9029. And the results indicate that BP26r is a good serological marker for B. ovis infection in sheep. === Brucella ovis é uma das principais causas de epididimite em carneiros sexualmente maduros, resultando em subfertilidade e infertilidade e consequentes perdas econômicas para a ovinocultura, mundialmente. Contudo, não existe uma técnica para diagnóstico sorológico que apresente boa sensibilidade e especificidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver um teste de ELISA indireto (ELISAi) utilizando como antígeno proteínas recombinantes, BoP59r ou BP26r, para diagnóstico sorológico da infecção por B. ovis. A antigenicidade de BoP59r e BP26r, produzidas em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade, foi testadas por Western blot e ELISAi. Os testes de repetibilidade e reprodutibilidade do ELISAi foram realizados usando 500 ng e 1 µg de BoP59r e de BP26r por poço, com soros de um carneiro negativo e de um carneiro positivo à IDGA, isolamento bacteriano e PCR de urina, concomitantemente, sendo realizadas 10 repetições independentes. A BoP59r não discriminou ovino negativo de positivo, já a BP26r foi eficiente em diferenciar ovinos negativos de positivos. O ELISAi usando BP26r e soros de carneiros experimentalmente infectados por B. ovis, apresentou os melhores índices na diluição de soro de 1:20, com 100% de sensibilidade, 90,2% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) igual a 93,2%, valor preditivo negativo (VPN) igual a 100% e acurácia de 1,0. Em amostras de ovinos positivos somente à IDGA, os melhores resultados foram obtidos na diluição do soro em 1:40, com sensibilidade de 85,7%, especificidade de 85,4%, VPP igual 75%, VPN igual 92,1% e a acurácia foi de 0,9029. Os resultados indicam que a BP26r é um bom marcador sorológico da infecção por B. ovis em ovinos