Estudo da toxicidade do veneno bruto e detoxificado de Tityus serrulatus em ovinos produtores de antiveneno

• Main Author: Marina Guimar?es Ferreira
• Other Authors: Marilia Martins Melo
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2013
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9J2HAU

=== The aim of this study was to evaluate the toxicity of the crude venom of Tityus serrulatus and detoxified with glutaraldehyde in the production of scorpion antivenom in sheep, and study its neutralizing capacity in mice challenged with venom, as an alternative to replace the immunization protocol adopted in the country in production of antivenom. Twelve sheep, healthy, mean weight of 30 kg, were distributed into three groups (n=4): G1 (control), G2 (venom) and G3 (detoxified venom). It was used the immunization protocol (first cycle) adopted with six doses, three associated Freund's adjuvant, with space between them of 21 days and three with no adjuvant (booster) spaced three days. The G1 animals received the six immunizations with phosphate buffered saline (PBS) associated with Freund's adjuvant (1:1), while the other two groups received 0.5 mg of venom (G2) and detoxified venom (G3) , respectively, diluted in PBS, associated with the Freund adjuvant. The boosters counted with applying 1/3 of the initial dose, with only PBS. Before (time zero), 24 and 48 hours after immunization, all animals underwent clinical examinations, electrocardiograms and hematological and biochemical exams, dosing the AST, GGT, CK, LDH, urea, creatinine, glucose, pancreatic amylase, total protein and fractionated. Seven days after the first cycle of immunization, all animals were euthanized and gross and microscopic exams were evaluated. Any amendment macro or microscopic been seen in animal studies. Only animals of G2 showed mild clinical changes suggestive of the action of Tityus serrulatus. Regarding hematological profile, significant change in the number of leukocytes, neutrophils and eosinophils was observed in the three groups and the first three immunizations, in which we used Freund's adjuvant. There was a gradual increase in the enzyme GGT in animals of G3, suggesting a possible hepatotoxic discrete action of glutaraldehyde. Regarding the fractionated proteins, the fraction beta2, especially in groups 2 and 3, was increased in the booster immunizations, showing an inflammatory response. For neutralization assays it was used Swiss mice, with an average weight of 26 g distributed into 15 groups (n = 4): G1 to G4 (200 ul of antivenom control sheep + T. serrulatus venom), the G5 to G8 (200 ul of antivenom sheep immunized with crude + venom T. serrulatus venom), the G9 to G12 (200 ul of antivenom sheep immunized with detoxified venom+ venom of T. serrulatus), G13 (T. serrulatus venom), G14 (antivenom from the FUNED + venom of T. serrulatus) and G15 (pool serum of sheep receiving Freund's adjuvant without venom). We found rates of protection of 25%, 56.3% and 43.8% for sera from the G1, G2 and G3, respectively. It is concluded that the venom detoxified with glutaraldehyde may be used as immunogen, since animals of G3 showed no signs of toxicity while undergoing this immunization protocol and they were able to produce neutralizing antibodies venom of T. serrulatus in mice challenged. === O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do veneno bruto de Tityus serrulatus e detoxificado com glutaraldeído na produção de antiveneno escorpiônico em ovinos e estudar a sua capacidade neutralizante em camundongos desafiados com veneno, como possível alternativa na substituição do protocolo de imunização adotado no país na produção de soros hiperimunes. Doze ovinos, saudáveis, peso médio 30 kg, foram distribuídos em três grupos (n=4): G1 (controle), G2 (veneno bruto) e G3 (veneno detoxificado), sendo o protocolo de imunização adotado com seis doses, três associadas ao adjuvante de Freund, com espaço de 21 dias entre elas e três sem adjuvante (reforços), espaçadas em três dias. Os animais do G1 receberam nas três primeiras imunizações solução salina tamponada em fosfato (PBS) associada ao adjuvante de Freund, numa proporção de 1:1, enquanto os outros dois grupos receberam 0,5 mg do veneno bruto (G2) e detoxificado (G3) respectivamente, diluído em PBS, associado ao adjuvante. Os reforços contaram com aplicação de 1/3 da dose inicial, somente com PBS. Antes (tempo zero), 24 e 48h após as imunizações, todos os animais foram submetidos a exames físicos, eletrocardiogramas e exames hematológicos e bioquímicos, dosando-se AST, GGT, CK, LDH, uréia, creatinina, glicose, amilase pancreática e proteínas totais e fracionadas. Sete dias após o primeiro ciclo de imunização, todos os animais foram eutanasiados e realizados exames macro e microscópicos, não sendo encontrada nenhuma alteração. Somente os animais do G2 apresentaram alterações clínicas discretas sugestivas da ação do veneno de Tityus serrulatus. Não houve alteração significativa do número de leucócitos, neutrófilos e eosinófilos nos três grupos estudados e nas três primeiras imunizações. Observou-se aumento gradual da enzima GGT no G3, sugerindo uma possível e discreta ação hepatotóxica do glutaraldeído. Houve aumento da fração beta-2 especialmente nos grupos 2 e 3, nas imunizações com os reforços, demonstrando uma reposta inflamatória. Para os ensaios de soroneutralização foram utilizados camundongos Swiss, com peso médio de 26 g, divididos em 15 grupos (n=4): G1 a G4 (200 ul de antiveneno dos ovinos controle + veneno de T. serrulatus), G5 a G8 (200 ul de antiveneno dos ovinos imunizados com veneno bruto + veneno de T. serrulatus), G9 a G12 (200 ul de antiveneno dos ovinos imunizados com veneno detoxificado + veneno de T. serrulatus), G13 (veneno de T. serrulatus), G14 (soro anti-escorpiônico proveniente da FUNED + veneno de T. serrulatus) e G15 (pool de soro dos ovinos que receberam adjuvante de Freund sem veneno). Foram encontradas taxas de proteção de 25%, 56,3% e 43,8% para os soros oriundos do grupo G1, G2 e G3, respectivamente. Conclui-se que o veneno detoxificado com glutaraldeído pode ser utilizado como imunógeno, uma vez que os animais do G3 não apresentaram sinais de toxicidade quando submetidos a este protocolo de imunização e foram capazes de produzir anticorpos neutralizantes do veneno de T. serrulatus em camundongos desafiados.