Estudos conformacionais por RMN e cálculos teóricos das cadeias peptídicas da distinctina, peptídeo antimicrobiano isolado de Phyllomedusa distincta

• Main Author: Victor Hugo de Oliveira Munhoz
• Other Authors: Dorila Pilo Veloso
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2008
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SFSA-9H7KVX

=== This work concerns the solid phase synthesis of Chain 1 and Chain 2 of distinctin, an heterodimeric antimicrobial peptide, isolated from the glands of Phyllomedusa distincta anurans. The synthesis hereby used took place, by the means of Fmoc (9-fluorenylmethoxicarbonyl) strategy. In order to obtain information regarding preferencial conformations of these peptides in mediums that mimetize bacterial membranes, some experimental techniques, such as Circular Dichroism (CD) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) were used, as well as some theoretical methodologies like secondary structure prediction through protein data bases, molecular mechanics and semi-empirical minimizations, besides a wide array of computational techniques for conversion of NMR data into three-dimensional structural models. The CD analysis indicated, for both chains, a high content of -helical forms in aqueous solutions containing various TFE concentrations. The 2D NMR studies, by the usage of techniques such as TOCSY, NOESY, 1H 13C HSQC and 1H 15N HSQC in a 50% TFE aqueous solution, constituted in a part in which all the chemical shift signals were assigned in these contour maps, based on the results yielded by CD analysis, and also in a part in which the data obtained from the previous step were used to calculate bundles of possible structure models for both chains. This study yielded highly detailed structures for both monomers. === Neste trabalho, os monômeros Cadeia 1 e Cadeia 2 da distinctina, peptídeo antimicrobiano heterodimérico isolado das glândulas epiteliais de anuros da espécie Phyllomedusa distincta, foram sintetizados manualmente pela técnica de síntese de peptídeos em fase sólida, utilizando-se a estratégia química Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonila). Para se obterem informações acerca das conformações preferenciais desses peptídeos em meios análogos a membranas bacterianas, foram realizados diversos estudos, empregando técnicas experimentais, como Dicroísmo Circular (CD) e Ressonância Magnética Nuclear (RMN), e também teóricas, como previsões de estrutura secundária, utilizando bancos de dados de proteínas, otimizações de geometria por mecânica molecular e método semi-empírico, além de metodologias de conversão de dados de RMN em modelos estruturais tridimensionais. As análises de CD indicaram, para ambas as cadeias, um alto conteúdo de formas a-helicoidais em soluções aquosas contendo diversas concentrações de TFE. Os estudos por RMN 2D, empregando as técnicas TOCSY, NOESY, 1H 13C HSQC e 1H 15N HSQC em solução de 50% TFE em meio aquoso, constituíram uma etapa de atribuição de sinais de deslocamentos químicos desses mapas de contornos, com base nas informações obtidas por CD, e uma etapa subseqüente de cálculo estrutural a partir dos dados obtidos na etapa anterior. A partir desses estudos, foi possível obter estruturas para ambos os monômeros com um considerável nível de detalhamento.