Identificação de genes diferencialmente expressos em cepas de Entamoeba histolytica após ativação da virulência.

• Main Author: Helen Cristine Fernandes
• Other Authors: Maria Aparecida Gomes
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2009
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/SAGF-8H9MYV

=== Entamoeba histolytica é um protozoário parasito que representa risco para a saúde de milhões de indivíduos. Em virtude da existência de diversas formas clínicas da doença e de cepas com virulências distintas, é de se esperar que ocorram variações no perfil de transcritos gênicos entre cepas atenuadas e virulentas. Neste trabalho, a técnica de apresentação diferencial de RNAs (DDRT-PCR) foi utilizada com o intuito de identificar genes diferencialmente expressos entre cepas atenuadas, HM1 e CSP e reisoladas (virulenta), HM1R e CSPR de E. histolytica. Para alcançar esse objetivo, RNAs das cepas atenuadas e reisoladas foram extraídos, o cDNA foi preparado e submetido a reações de PCR utilizando iniciadores aleatórios em condições de baixa estringência. Inicialmente, 29 fragmentos foram identificados como específicos das cepas reisoladas, sendo que 14 foram clonados e seqüenciados. Estas seqüências foram submetidas à pesquisa de homologia em bancos de dados, totalizando 12 genes a serem testados. O caráter de expressão diferencial foi avaliado pelas técnicas de RT-PCR semiquantitativa e por PCR em tempo real para 11 dos genes encontrados. Houve a confirmação da expressão diferencial de todos, sendo 10 mais expressos pelas cepas reisoladas e um pelas cepas atenuadas. Os genes confirmados, por RT-PCR em tempo real e RT-PCR semiquantitativa, como mais expressos nas cepas reisoladas de E. histolytica foram os que codificam proteínas hipotéticas, fosfatase ácida, fator de troca de nucleotídeo Ras guanina, enzima envolvida no transporte de cálcio e proteína similar à cdc48. Além disso, também foi avaliada, entre as cepas atenuadas e reisoladas a expressão dos genes da acetiltransferase, triptofanil tRNA sintetase, proteína diaphaunos e cisteil proteinase 1, considerados mais expressos em trofozoítos provenientes de lesão em fígado de hamster quando comparados aos de cultura. Destes, os três primeiros foram mais expressos nas cepas reisoladas, demonstrando que o perfil de transcrição, ao menos para alguns genes, nas cepas reisoladas reflete ao encontrado nos trofozoítos presentes em abscesso hepático em modelo experimental.