| Summary: | === Nowadays, malaria is the worlds most incident parasitic infection. The artemisinin based combination therapy (ACT) has been advocated as a promising treatment for malaria and artemetherlumefantrine (20+120 mg) is the main recommended association in endemic areas. In spite of the wide use of this association, the scientific literature is still scarce regarding analytical methods for the quantitation of artemether and lumefantrine in pharmaceutical products and biological matrices. The aim of the present work was developing and validating analytical methods for the quantitation of artemether and lumefantrineisolated in pharmaceutical raw materials and simultaneously in fixed dose combination tablets and human plasma. The analytical method described in the International Pharmacopeia 4th edition by HPLC-UV wasadapted and validated for the quantitation of artemether in pharmaceutical raw material. Three analytical methods were developed and statistically compared for lumefantrine determination: HPLC, UV and non aqueous titration. The chromatographic analysis was performed in a C18 column and mobile phase composed of methanol and 0.05% trifluoroacetic acid (80:20). The robustness of the HPLC method wasevaluated by means of Youdens test, which allowed analysing the influence of seven analytical parameters in the final result. In the spectrophotometric method, the detection was performed at 335 nm. The titulant employed in the volumetric method was 0.1 M perchloric acid in glacial acetic acid. All methods showed to be adequate for the quantitation of the drug in raw material, while for the tablet assay, HPLC and UV provided the most reliable results. The simultaneous quantitation of artemether and lumefantrine in fixed dose combination tablets was carried out by means of artemether standard addition method, by HPLC with cyano column, mobile phase composed of acetonitrile and 0.05% trifluoroacetic acid (60:40) and UV detection at 210 nm. The developed method complied with all required validation parameters e showed to beadequate for routine analysis. A bioanalytical method by HPLC with detection by mass spectrometry and eletrospray ionization in the positive mode was developed for the quantitation of artemether and lumefantrinein human plasma. For the extraction of the drugs from plasma, protein precipitation and artesunate as internal standard were employed. The chromatographic analysis was performed using a cyano column andthe employed transitions for the quantitation of artemether, lumefantrine and artesunate were m/z 316 m/z 267, m/z 530 m/z 348 e m/z 402 m/z 267, respectivelly. The method showed to be selective, precise,acurate, besides providing recovery rates higher than 80% for all drugs. Linearity of the method for artemether was proved in the range from 10 to 1000 ng/ml, while for lumefantrine, a quadratic curve was obtained in the range from 10 to 18000 ng/ml. The clinical study with volunteers allowed obtaining plasmatic absorption curves, as well as the pharmacokinetic parameters. The maximum plasmatic concentration of artemether, 57.4 ng/ml, was reached 1.9 h after the drug administration, whereas for lumefantrina, a maximum concentration of 1979.9 ng/ml was reached after 5.8 h. The study of the fragment structures and fragmentation routes of artemether and lumefantrine was also performed. The development of simple and rapid analytical methods is extremely important to evaluate the quality of the antimalarials distributed nowadays and to contribute to assuring the treatment efficacy, while the developed bioanalytical methodrepresents a useful tool for bioavailability and bioequivalence studies.Key wo === Atualmente, a malária é a infecção parasitária de maior incidência mundial. A terapia de combinação com artemisinina (ACT) tem sido proposta como um tratamento promissor para malária, sendoartemeter-lumefantrina (20+120 mg) a principal associação recomendada em áreas endêmicas. Apesar da ampla utilização desta associação, a literatura científica ainda é escassa em relação a métodos analíticos para quantificação de artemeter e lumefantrina em produtos farmacêuticos e matrizes biológicas. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para quantificação de artemeter e lumefantrina isoladamente em matérias-primas farmacêuticas e simultaneamente em comprimidos de dosefixa combinada e em plasma humano. O método analítico descrito na Farmacopéia Internacional 4ª edição por CLAE-UV foi adaptado e validado para quantificação de artemeter em matéria-prima farmacêutica. Para determinação de lumefantrina, três métodos analíticos foram desenvolvidos e comparados estatisticamente:CLAE, UV e tilulação em meio não aquoso. A análise cromatográfica foi realizada em coluna C18, com fase móvel composta por metanol e ácido trifuoroacético 0,05% (80:20). A robustez do método por CLAE foiavaliada por meio de Teste de Youden, que permitiu analisar a influência de sete parâmetros analíticos no resultado final. Para o método espectrofotométrico, empregou-se detecção em 335 nm. Ácido perclórico 0,1M em ácido acético glacial foi utilizado como titulante no método volumétrico. Os três métodos se mostraramadequados para quantificação do fármaco em matéria-prima, enquanto para análise dos comprimidos,CLAE e UV forneceram resultados mais confiáveis. A quantificação simultânea de artemeter e lumefantrinaem comprimidos de dose fixa combinada foi realizada por meio de um método de adição de padrão deartemeter por CLAE, com coluna Ciano, fase móvel composta por acetonitrila e ácido trifluoroacético 0,05%(60:40) e detecção UV em 210 nm. O método desenvolvido cumpriu com todos os parâmetros de validaçãoexigidos e se mostrou adequado para análises rotineiras. Desenvolveu-se, ainda, método bioanalítico por CLAE com detecção por espectrometria de massas e ionização por eletrospray no modo positivo para quantificação de artemeter e lumefantrina em plasma humano. Para extração dos fármacos do plasma,empregou-se precipitação de proteínas e artesunato como padrão interno. A análise cromatográfica foi realizada em coluna Ciano e as transições empregadas para artemeter, lumefantrina e artesunato foram m/z 316 m/z 267, m/z 530 m/z 348 e m/z 402 m/z 267, respectivamente. O método demonstrou ser seletivo, preciso e exato, além de fornecer taxas de recuperação superiores a 80% para todos os fármacos. A linearidade do método para artemeter foi comprovada na faixa de 10 a 1000 ng/ml, enquanto para lumefantrina uma curva quadrática foi obtida na faixa de 10 a 18000 ng/ml. O estudo clínico com voluntários permitiu a obtenção das curvas de absorção plasmática e dos parâmetros farmacocinéticos. A concentração plasmática máxima de artemeter, 57,4 ng/ml, foi alcançada após 1,9 h da administração do medicamento, enquanto para lumefantrina, a concentração máxima de 1979,9 ng/ml foi alcançada em 5,8 h. Realizou-se, ainda, estudo das estruturas dos fragmentos e das rotas de fragmentação de artemeter e lumefantrina. O desenvolvimento de métodos analíticos rápidos e simples é de extrema importância para avaliar a qualidade dos medicamentos antimaláricos distribuídos atualmente, enquanto o método bioanalítico desenvolvido constitui uma ferramenta útil para estudos de biodisponibilidade e bioequivalência.
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