Caracterização de células-tronco mesenquimais isoladas do líquido amniótico humano e submetidas ao processo de criopreservação.

• Main Author: Patricia Caroline Angelo
• Other Authors: Alamanda Kfoury Pereira
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2010
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/ECJS-85YJ8R

=== Introduction: in the cell therapy context, cryopreservation of mesenchymal stem cells from human amniotic fluid has a great clinical importance since these cells can be harvested even in the prenatal period and can be stored for use in future treatments. Objectives: This study aimed to characterize the mesenchymal stem cells cultured from human amniotic fluid before and after the cryopreservation process, as to maintain their multipotent differentiation capacity, viability and chromosomal stability. Methodology: The study included samples from pregnant women, which were grown, characterized and subjected to cryopreservation for 150 days. For the cellular characterization, flow cytometry tests were performed to determine the immunophenotypic profile of cultured cells, cell differentiation, karyotype determination and cell viability. To check the maintenance of cell characteristics after cryopreservation, the cells were thawed and then tests of cell viability, culture, cell differentiation and karyotype were performed again. In order to verify the interference of cryopreservation on the gene expression associated with pluripotency, octamer 4 (OCT-4) this gene expression was quantified before and after cryopreservation. Results: These cells characterization showed that those cells grown from human amniotic fluid present morphology and immunophenotypic profile characteristic of mesenchymal stem cells and also have the ability to differentiate into cells of mesodermal lineage. The study also showed that from criobiology techniques, these cells can be cryopreserved for at least five months and be recovered after this period, maintaining its ability to in vitro growth and differentiation and still maintaining OCT-4 gene expression, thereby indicating the maintenance of its characteristic of stem cell. Moreover, these cells karyotype analysis indicated that both culture and cryopreservation did not induce the appearance of chromosomal aberrations, which is important for a possible therapeutic use. Conclusion: This study concluded that the cryopreservation technique of cells from amniotic fluid can be an extremely useful tool in maintaining the capacity of multipotent stem cells collected during pregnancy. === Introdução: no contexto da terapia celular, a criopreservação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico humano é de acentuada importância clínica, uma vez que essas células podem ser colhidas ainda no período pré-natal e podem ser armazenadas para serem usadas em tratamentos posteriores. Objetivos: este estudo teve como objetivo caracterizar as células-tronco mesenquimais cultivadas do líquido amniótico humano antes e após o processo de criopreservação, quanto à manutenção da sua capacidade de diferenciação multipotente, viabilidade e estabilidade cromossômica. Metodologia: foram incluídas nesta pesquisa amostras de 10 gestantes, as quais foram cultivadas, caracterizadas e submetidas à criopreservação por 150 dias. Para a caracterização celular, foram realizados ensaios de citometria de fluxo para determinar o perfil imunofenotípico das células cultivadas; diferenciação celular; determinação do cariótipo e viabilidade celular. Para verificação da manutenção das características celulares após criopreservação, as células foram descongeladas e, então, foram feitos novamente os ensaios de viabilidade celular, cultura, diferenciação celular e cariótipo. Com o intuito de verificar interferências da criopreservação sobre a expressão do gene associado à pluripotência, octamer 4 (OCT-4), foi quantificada a expressão desse gene antes e após criopreservação. Resultados: a caracterização dessas células demonstrou que aquelas cultivadas do líquido amniótico humano apresentam morfologia e perfil imunofenotípico característico das células-tronco mesenquimais e, além disso, têm a capacidade de diferenciação em células da linhagem mesodermal. Ainda, o estudo demonstrou que, a partir de técnicas de criobiologia, essas células podem ser criopreservadas durante pelo menos cinco meses e serem recuperadas após esse período, mantendo sua capacidade de crescimento in vitro e de diferenciação e mantendo, ainda, a expressão do gene OCT-4, indicando, assim, a manutenção de sua característica de célula-tronco. Além disto, a análise cariotípica dessas células indicou que tanto a cultura quanto a criopreservação não induziram surgimento de aberrações cromossômicas, fato importante para uma possível utilização terapêutica. Conclusão: este trabalho concluiu que a técnica de criopreservação de células do líquido amniótico pode ser ferramenta extremamente útil na manutenção da capacidade das células-tronco multipotentes recolhidas durante a gravidez.