Avaliação da atividade de telomerase em células-tronco embrionárias indiferenciadas e em células neoplásicas de camundongo

• Main Author: Francisco de Assis Nunes Pereira
• Other Authors: Agnaldo Lopes da Silva Filho
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2008
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/ECJS-84NHFH

=== Telomerase is an enzyme which plays a role in the maintenance of the proliferation ability of the cells and in the protection and stabilization of the chromosomes. The main function of telomerase is to add telomere sequences at the end of each chromosome, protecting it from DNA damage, and functioning as a biological clock, limiting the maximum number of divisions each cell can undergo. The telomerase activity (TA) can be detected in highly replicative cells, like stem cells and cancer cells, but not in the majority of the differentiated cells of the human organism. The study of telomerase can result in efficient forms of controlling the cell proliferation ability, can also be useful both in the treatment of cancer and also in the researches concerning stem cell therapy. The purpose of this study is to evaluate the TA in different passages of mouse embryonic stem cells (mESC) and to compare the TA of the mESC with mouse neoplastic cells. TRAP-ELISA method was used in a semiquantitative evaluation of TA. Three mESC lineages were evaluated, named CT2, CT3 and CT4 respectively, in three different passages (P13, P15 and P19) each one. All the samples were evaluated according to the presence of undifferentiation markers (genes OCT4 and NANOG) All the samples were evaluated according to the presence of undifferentiation markers (genes OCT4 and NANOG). The cancer cells evaluated were B16F1 (melanoma); B16F10 (metastatic melanoma) and CT26WT (colon carcinoma). The results are expressed as percentage in conformity with a standard of highly known TA.. The CT2 showed 1.09%, 13.24% and 36.90% in P13, P15 and P19 respectively. The CT3 showed 1.46%, 21.82% and 22.37% in P13, P15 and P19 respectively. The CT4 showed 3.82%, 39.05% and 34.22% respectively. The mean TA of the three mESC lineages was 1.59% in P13, 18.53% in P15 and 23.37% in P19. The cancer lineages B16F1, B16F10 e CT26WT showed 128.60%, 1.45% and 30.94% respectively. The results obtained demonstrated all the samples with high TA. The three passages of mESC showed a tendency of increase in TA and subsequent stabilization. The cancer lineages showed more variable TA values. The results achieved after data analysis let us conclude that both mESC and cancer lineages demonstrate a high capacity of proliferation, due to the high values of TA found in this study. === A telomerase é uma enzima envolvida na manutenção da capacidade de replicação das células e na proteção e estabilização dos cromossomos. Sua função principal é reconstruir os telômeros, seqüências repetitivas situadas nas pontas de cada cromossomo, que protegem contra danos no ácido desoxirribonucléico (DNA) e que também funcionam como relógio biológico, limitando o número de vezes pelas quais a célula pode se dividir. A telomerase encontra-se ativa em células com alta capacidade de replicação, como célulastronco e células neoplásicas, e não é detectada na maioria das células diferenciadas de um organismo adulto. O estudo da telomerase pode resultar em maneiras de se controlar, aumentando-se ou inibindo-se, a capacidade de replicação celular, situação bastante útil tanto no campo da oncologia quanto no processo de terapia celular com células-tronco. Os objetivos deste trabalho foram: avaliar a atividade da telomerase (AT) em diferentes passagens de células-tronco embrionárias indiferenciadas de camundongo (CTEc) e comparar a AT das CTEc com linhagens de células de tumor de camundongo. Foi utilizado o método TRAPELISA para avaliação semiquantitativa da AT. Foram estudadas três linhagens de CTEc, denominadas CT2, CT3 e CT4. As passagens celulares avaliadas foram as de número 13, 15 e 19, denominadas P13, P15 e P19, respectivamente. Todas as passagens celulares foram avaliadas em relação ao estado de indiferenciação, a partir da presença dos genes OCT4 e NANOG. As linhagens de tumor avaliadas foram B16F1 (melanoma), B16F10 (melanoma metastático) e CT26WT (tumor de cólon). Os resultados são expressos em porcentagem diante de um padrão com alta AT conhecida. A CT2 apresentou 1,09% em P13, 13,24% em P15 e 36,90% em P19. A CT3 apresentou 1,46% em P13, 21,82% em P15 e 22,37% em P19. A CT4 apresentou 3,82% em P13, 39,05% em P15 e 34,22% em P19. A média das três linhagens foi P13 1,59%, P15 18,53% e P19 23,37%. As linhagens de tumor B16F1, B16F10 e CT26WT apresentaram, respectivamente, 128,60, 1,45 e 30,94%. Nas três passagens de CTEc avaliadas, observou-se tendência a aumento inicial, com posterior estabilização da AT. As linhagens celulares de tumor de camundongo apresentam AT com valores mais variáveis. Os resultados permitem concluir que tanto as CTEc quanto as linhagens de tumor apresentam alta capacidade de multiplicação, expressa pelas medidas elevadas de AT encontradas.