Expressão de ativina A em células-tronco embrionárias de camundongo durante o processo de diferenciação em osteoblastos

• Main Author: Bruno Muzzi Camargos
• Other Authors: Fernando Marcos dos Reis
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2013
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9JNHG7

=== The search for anabolic agents has been widely researched for osteoporosis therapy. Embryonic stem cells (ESC), differentiated into osteoblasts, have been used for the study of cell physiology. Protocols osteoblastic cell differentiation have been successfully performed. A common stimulus used on most osteoblastic differentiation protocols is bone morphogenetic protein (BMP) . Activin A, a growth factor with structure and function homologous to BMP, has important effects on the proliferation of osteoblasts and bone remodeling. However, the definition of the exact moment when activin A acts on bone mineralization demand studies. OBJECTIVE: To evaluate the expression of activin A on a mouse ESC protocol used to differentiate them into osteoblasts. MATERIAL AND METHODS: Adopt a technical modification to an osteoblastic ESC culture differentiation protocol (Kawaguchi, 2006), isolated at the Laboratory of Human Reproduction Prof. Aroldo Fernando Camargos - Hospital das Clínicas / UFMG. Real time polymerase chain reaction (PCR) evaluated genic expression at different stages during the protocol for markers of celular indifferentiation (Oct -4, Nanog), markers of osteoblastic differentiation (osteocalcin, bone alkaline phosphatase, RUNX2) and Activin A at different stages of differentiation protocol. RESULTS: Markers of osteoblast differentiation increased as the culture moved towards osteoblastic differentiation. Activin A expression showed a direct association to the markers of bone formation. The protocol favored the differentiation of osteoblasts precursor cells. CONCLUSION: Activin A was expressed in cell cultures of mice ESC since an intermediate stage of differentiation into osteoblasts, following the pattern of cellular expression observed for other markers of bone formation, such as osteocalcin, during the differentiation protocol. === A busca de agentes anabolizantes tem sido alvo da pesquisa na terapia da osteoporose. As células-tronco embrionárias (CTE), diferenciadas em osteoblastos, têm sido utilizadas para o estudo da fisiologia celular. Protocolos de diferenciação celular em osteoblastos têm sendo utilizados com sucesso. Um estímulo comum aos protocolos de diferenciação osteoblástica é a proteína morfogenética óssea (BMP). Ativina A, um fator de crescimento que tem estrutura e função parcialmente homólogas ao BMP, apresenta efeitos importantes sobre a proliferação de osteoblastos e a remodelação óssea. Contudo, a definição do momento em que Ativina A passa a agir sobre a minealização óssea demanda maiores estudos. OBJETIVO: avaliar a expressão de Ativina A em CTE de camundongo durante protocolo de diferenciação celular para osteoblastos. MATERIAL e MÉTODOS: adaptamos técnicas de cultivo celular adotadas em protocolo de diferenciação de CTE em osteoblastos (Kawaguchi, 2006) e acompanhamos a diferenciação fenotípica in vitro de uma linhagem de células-tronco embrionárias (CT-4), isolada no Laboratório de Reprodução Humana Prof. Aroldo Fernando Camargos do Hospital das Clínicas da UFMG. Aplicamos o método de reação da cadeia de polimerase (PCR) em tempo real em diferentes fases do processo para evidenciar a expressão gênica de marcadores de indiferenciação celular (Oct-4 e Nanog), marcadores de diferenciação osteoblástica (osteocalcina, fosfatase alcalina óssea e RUNX-2 e da Ativina A. Correlacionamos a expressão de todos esses genes-alvo em diferentes fases do processo de diferenciação. RESULTADOS: constatamos que a expressão de marcadores de diferenciação para a linhagem osteoblástica aumentou à medida em que a cultura avançou no sentido da diferenciação terminal em osteoblastos. A expressão da Ativina A acompanhou, num relação direta, o padrão de expressão verificado nesses marcadores de formação e diferenciação óssea. O protocolo favoreceu a diferenciação de precursores celulares de osteoblastos. CONCLUSÃO: a Ativina A foi expressa em cultivos celulares de CTE de camundongos em estágio intermediário de diferenciação em osteoblastos, acompanhando o padrão de expressão celular verificado para outros marcadores de formação óssea como a osteocalcina.