| Summary: | === Brucella ovisis a significant cause of epididymitis and thus causes economic loss to the sheep industry by affecting animal reproduction. Considering the scarcity of studies on the interaction of B. ovis with innate system components, such as Toll-like receptors (TLR), this work highlights the importance of TLR signalling to resistance to B. ovis and the protein TcpB, described as an evasion mechanism of TLR signaling in B. abortus and B. melitensis, as a virulence factor. C57/BL6 knockout forTLR2, TLR4, TLR9, and MyD88 mice were infected with B. ovisand euthanized after seven days of infection (dpi) for bacteriologic, histopathologic and gene expression evaluation. MyD88-/- mice showed higher spleen colonization when compared with wild-type C57/BL6 mice. This increase in susceptibility was due to smaller inflammatory response in these animals, demonstrated by smaller inflammation in spleen and liver and smaller transcription of proinflammatory citokines such as TNF-and IL-6, necessary for proper response against Brucella. TLR9-/- mice also presented larger spleen bacterial colonization in comparison with wild-type mice, having, however, developed larger inflammatory response than the control group. TLR2-/- e TLR4-/- mice showed no diferent susceptibility to B. ovisinfection in comparison with wild-type mice. Therefore, MyD88 is necessary for the developmentof efficient
inflammatory response against B. ovis in the murine model. Additionally, a mutant strain of B. ovis was generated from the deletion of the tcpBgene. B. ovis tcpB was inoculated in C57/BL6 mice and the infection kinetic was carried out. The absence of this gene resulted in in vivo attenuated phenotype, characterized by smaller bacterial colonization from 1 dpi and lack of capacity to persist in host. However, this mutant
strain showed a growth defect in vitro. Therefore, the functional protein TcpB is necessary for B. ovisvirulence and survival in mice, but further bacteriological studies of the mutation developed in this work should be carried out to determineif the sample shows a metabolic or growth defect. === A Brucella ovisé uma importante causa de epididimite em ovinos e consequentemente ocasiona perdas econômicas para a ovinocultura por afetar a reprodução dos animais. Considerando a escassez de estudos sobre como a B. ovis interage com componentes dos sistema imunológico inato, como os receptores semelhante a Toll (TLR), este
trabalho caracterizou a importância da sinalização por TLR para o controle da infecção por B. ovis e a proteína TcpB, descrita anteriormente como mecanismo de evasão da sinalização TLR em B. abortus e B. melitensis. Camundongos C57/BL6 knockout para TLR2, TLR4, TLR9 e MyD88 foram infectados com B. ovise submetidos a eutanásia
após sete dias de infecção (dpi) para avaliação bacteriológica, histopatológica e número de cópias de RNA. Observou-se que os camundongos MyD88-/- apresentaram maior colonização esplênica quando comparados com os camundongos C57/BL6 selvagens.
Este aumento de susceptibilidade ocorreu devido ao menor desenvolvimento de resposta inflamatória destes animais, demonstrado por menor inflamação em baço e fígado e menor transcrição de citocinas pró-inflamatórias como TNF-e IL-6, necessárias para o
desenvolvimento adequado de resposta contra Brucella. Os animais TLR9-/- também apresentaram maior colonização bacteriana esplênica quando comparados com camundongos selvagens mas, interessantemente desenvolveram uma resposta inflamatória maior que o grupo controle. Em comparação com camundongos selvagens,
animais TLR2-/- e TLR4-/- não apresentaram diferenças de susceptibilidade à infecção por B. ovis. Portanto, MyD88 é necessário para o desenvolvimento de uma resposta inflamatória eficaz contra B. ovis no modelo murino. Adicionalmente, foi gerado uma amostra mutante de B. ovis construída a partir da deleção do gene tcpBe a cinética de infecção foi realizada em camundongos C57/BL6. A ausência deste geneacarretou em fenótipo atenuado in vivo caracterizado pela menor colonização bacteriana desde o primeiro dpi e incapacidade de persistir no hospedeiro até 30 dpi. Contudo, esta amostra mutante apresentou uma deficiência de crescimento in vitro. Portanto, a proteína TcpB funcional é necessária para a virulência e sobrevivência de B. ovisem camundongos, mas estudos bacteriológicos com o mutante desenvolvido neste estudo devemser realizados para determinar se a amostra apresenta um defeito metabólico ou de crescimento.
|
|---|
