| Summary: | === The objectives of this study were: to evaluate a manual method for obtaining autologous platelet concentrate (APC) in dog and cat for clinical purposes, measure the concentrations of transforming growth factor beta 1 (TGF-1) and platelet-derived growth factor type AB (PDGFAB) in dogs and cats, in plasma and autologous platelet concentrates (APC) activated with calcium gluconate or calcium chloride, measure the concentrations of TGF-1 in dogs, in plasma and APC activated with calcium gluconate or batroxobin, measuring the concentrations of TGF-1 and platelet derived growth factor type BB (PDGF-BB) in cats, in plasma and APCactivated with calcium gluconate or bovine thrombin, to evaluate by transmission electron microscopy ultrastructural characteristics of blood clots of APC activated with calcium gluconate or batroxobin, in dogs and cats, and too evaluate radiographic and plate force gait analysis, the therapeutic effect of APC in the treatment of osteoarthritis (OA) acquired in the dog. For standardization, we used 12 dogs and 12 cats. To evaluate the reproducibility of the methodology and cellular characteristics of APC, we used 16 animals of each species. These last dogs and cats, the plasma derived from the blood centrifugation was divided into two equalfractions, namely, PC-A and PC-B. Platelet concentrate-A (lower fraction) was considered as the first 50% plasma fraction near to the packed cell volume (PCV), and PC-B (upper fraction) represented the 50% remaining plasma. The same groups of animals were used for determining the concentration of growth factors. For standardization, to obtain the plasma blood was collected with EDTA and APC was obtained from blood collected with ACD-A solution. TGF- 1 and PDGF-AB concentrations after activation with gluconate or calcium chloride were measured in dogs and PDGF-AB in cats. To reproducibility, for blood collection was used vialswith ACD-A solution to obtain the plasma and APC. Was determined concentration of TGF-1 after activation with calcium gluconate or batroxobin in dogs; TGF-1 and PDGF-BB concentrations in cats, after activation with calcium gluconate or bovine thrombin. We used blood from another group of four dogs and four cats, for to evaluate the ultrastructuralcharacteristics of blood clots obtained of APC activated with calcium gluconate or batroxobin. Cell counts were performed in whole blood and the APC. It was found in all samples statistically significant (P <0.01) between the number of platelets, leukocytes, granulocytes, monocytes, but not between the values of lymphocytes in whole blood and the APC. Platelet efficiency concentration was 22.20% to 46.34% in dogs and 24.75% to 35.39% in cats. The percentage of platelet concentration in APC relative to the total blood was from 49.40% to 224.38% in dogs and 73.28% to 147.70% in cats. In dogs the concentration of TGF-1 wasstatically significantly higher (P <0.01) in fraction A of APC. In cats there was no significant difference (P> 0.01) in TGF-1 and PDGF-BB concentrations between the A and B fractions of APC. In dogs was found statistically significant difference (P<0.01) when compared intracellular space area and fiber area, in clots of APC that were activated with calciumgluconate or batroxobin. In cats clots obtained from APC activated with batroxobin show statistical difference (P <0.01) in area of platelets, area of fibrin fibers, ratio minor-major axes, ratio major-minor axes. We used 10 dogs, of different breeds with cranial cruciate ligament (CCL) rupture. These dogs were treated surgically by replacement of CCL with auto-graft of fascia lata, guided for video arthroscopy. They were divided into two groups according to postoperative period, six dogs received three intra-articular injections of autologous platelet concentrate (group I), starting immediately after surgery and at intervals of 15 days, and fourdogs received a modifying agent of OA daily, for all time of evaluation (group II). Radiographic evaluation showed, in both groups of patients, discrete evolution of OA. Group I was better in plate force gait analysis with favorable strength and returning the support member operated inall animals. At 90 days, the support of body mass on the operated limb was equal to that of contralateral limb. In-group II the support in the operated limb has evolved slightly, supporting the same body mass over 90th days. At 90 days, the support body mass of the contralateral limbwas greater than the affect limb. The results indicate that tube method allows for simple centrifugation concentrate platelets in dogs and cats. The calcium gluconate is the substance suitable for activation of APC in dogs and cats, and A fraction of APC in dogs must be used fortherapeutic purposes, in the cat both portions may be used. The results suggest the possible potential of APC as a biological alternative, versatile and economical, as a therapeutic option in the treatment of OA. === Objetivou-se com este estudo: avaliar um método manual para obter concentrado autólogo de plaquetas (CAP) no cão e no gato para aplicação clínica, medir as concentrações do fator de crescimento beta transformador 1 (TGF-1) em cães e fator de crescimento derivado dasplaquetas tipo AB (PDGF-AB) em cães e gatos no plasma e nos concentrados autólogos de plaquetas (CAP) ativados com gluconato de cálcio ou cloreto de cálcio, medir as concentrações de TGF-1 em cães no plasma e nos CAP ativados com gluconato de cálcio ou batroxobina,medir as concentrações de TGF-1 e do fator de crescimento derivado das plaquetas tipo BB (PDGF-BB) em gatos no plasma e nos CAP ativados com gluconato de cálcio ou trombina bovina, avaliar por microscopia eletrônica de transmissão as características ultra-estruturais de coágulos sanguíneos de CAP ativados com gluconato de cálcio ou batroxobina, avaliar radiograficamente e em plataforma de força o efeito terapêutico do CAP no tratamento daosteoartrose (OA) adquirida no cão. Para a padronização do método do tubo para se obter CAP, utilizaram-se 12 cães e 12 gatos. Para avaliar a reprodutibilidade da metodologia e das características celulares dos CAP utilizaram-se 16 animais de cada espécie. Neste últimos animais o plasma derivado de centrifugação foi dividido em duas frações iguais, a fração A correspondeu aos primeiros 50% de plasma adjacente da interface sangue-plasma e a fração B correspondeu aos 50% do plasma restante no tubo. Nestes mesmos grupos foi feita a determinação dos fatores de crescimento. Na etapa de padronização o sangue foi colhido em frascos com EDTA para obtenção do plasma e o CAP foi obtido de sangue colhido num frasco com solução ACD-A. Foi medida a concentração de TGF-1 e PDGF-AB em cães e PDGF-AB no gato, no plasma e no sobrenadante de CAP ativado com gluconato ou cloreto de cálcio. Na etapa de reprodutibilidade o plasma e o CAP foram obtidos utilizando ACD-A. Foi medida a concentração de TGF-1 no plasma e no sobrenadante de CAP ativados com gluconato de cálcio ou batroxobina no cão, e a concentração de TGF-1 e PDGF-BB no plasma e no sobrenadante de CAP ativado com gluconato de cálcio ou trombina bovina no gato. Empregou-se um outro grupo de quatro cães e quatro gatos para avaliar as características ultra-estruturais de coágulossanguíneos obtidos de CAP ativado com gluconato de cálcio ou batroxobina. Foram feitas contagens celulares no sangue total e no CAP. Verificou-se em todas as amostras diferenças estatisticamente significativas (P<0,01) entre a quantidade de plaquetas, leucócitos,granulócitos, monócitos, mas não entre os valores de linfócitos, no sangue total e no CAP. A eficiência de concentração de plaquetas foi 22,20% a 46,34% nos cães e 24,75% a 35,39% nos gatos. A porcentagem de concentração de plaquetas nos CAP em relação ao sangue total foi 49,40% a 224,38% nos cães e 73,28% a 147,70% nos gatos. Em cães a concentração de TGF-1 foi estatisticamente (P<0,01) mais alta na fração A do CAP. No gato não se verificou diferençasignificativa (P>0,01) na concentração de TGF-1 e de PDGF-BB entre as frações A e B do CAP. Verificou-se nos cães diferença estatisticamente significativa (P<0,01) em relação à área de espaço intracelular e área de fibras de fibrina nos coágulos de CAP que foram ativados com gluconato de cálcio ou batroxobina. Em gatos os coágulos obtidos a partir de CAP ativado com batroxobina apresentaram diferença estatística (P<0,01), em termos de área das plaquetas, área de fibras de fibrina, relação eixo menor eixo maior, relação eixo maior eixo menor, nos coágulos que foram ativados com gluconato de cálcio ou batroxobina, os resultados demonstram maior grau de ativação das plaquetas ativadas com gluconato de cálcio. Para avaliar o efeito terapêutico do CAP, utilizou-se 10 cães de diferentes raças com ruptura de ligamento cruzado cranial (RLCCr) que foram submetidos a tratamento cirúrgico de substituição do ligamento por autoenxerto de fáscia lata guiado por videoartroscopia. Os cães foram divididos em dois grupos segundo o pós operatório: seis receberam três injeções intra-articulares de CAP (grupo I), iniciando imediatamente após a cirurgia e em intervalos de 15 dias, e o outro grupo constituído por quatro cães, receberam um agente modificador da osteoartrose (OA), via oral, diariamente, durante o tempo de estudo (grupo II). A avaliação radiográfica evidenciou, nos dois grupos de pacientes evolução discreta da OA. Verificou-se no grupo I melhor apoio na plataforma de força com evolução favorável e retorno do suporte no membro operado em todos os animais. Aos 90 dias o suporte no membro operado era igual ao do contralateral. No grupo II o apoio no membro operado evoluiu discretamente, ao longo dos 90 dias de avaliação, mantendo-se maior apoio no membro contralateral. Os resultados indicam que o método de centrifugação única permiteconcentrar plaquetas nestas duas espécies. O gluconato de cálcio é a substância indicada para ativação das plaquetas no cão e no gato, e a fração A do CAP no cão deve ser a empregada para fins terapêuticos, e no gato ambas frações podem ser usadas. Os resultados sugerem o possível potencial do concentrado autólogo de plaquetas (CAP) como alternativa biológica, versátil e econômica, como terapêutica no tratamento da OA.
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