Aplicação da reação em cadeia da polimerase (PCR) e amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD-PCR) na detecção e identificação de Leptospira sp

• Main Author: Isabela Farnezi Veloso
• Other Authors: Elvio Carlos Moreira
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 1999
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8QDM4X

=== Leptospirosis is a disease economically important because it is one of the main infectious diseases that affect many animal species. In order to detect Leptospira sp by PCR analysis using the pair of primers Lep13/Lep14, three DNA extraction methods were used, All seven strains treated with proteinase K were PCR positive. All four strains treated with plant proteinase (E6870) were PCR positive, Only two strains were PCR positive when DNA from hve strains were extracted by heating. Sequential dilutions of L, hardjo/Hardjoprajitno (CTG) in urine were subjected to PCR with primers Lep13/Lep14 and its detection limit was 10²cels/mL. RAPD-PCR with primers B11/B12 was used to differentiate between bratislava, tarassovi, pomona, szwajizak, hardjo/Hardjoprajitno (OMS), hardjo/Hardjoprajitno (CTG) and mini serovars and as well as to characterize sequential dilutions of, hardjo/Hardjoprajitno (CTG) in urine. The tirst produced different and charactenstic band pattems for each strain tested. In the last, the detection limit was 10 4cells/mL. These results show that PCR can be used in detection of Leptospira sp in urine and that RAPD-PCR can be used in identihcation, characterization and differentiation of serovars. === A leptospirose possui importância econômica, pois é uma das principais doenças infecto-contagiosas que afetam várias espécies de animais. Para realização da PCR com os iniciadores Lep13/Lep14 na detecção de Leptospira sp foram utilizados três métodos de extração de DNA. Sete amostras submetidas à extração utilizando proteinase K produziram resultado positivo após a PCR. Quatro amostras submetidas à extração com proteinase de origem vegetal (E6870) também produziram resultado positivo após a PCR. Quando o DNA de cinco amostras foi extraído pelo método de aquecimento, apenas em duas foi possível observar amplificação após a PCR. Foram feitas diluições seriadas de L. hardjo/Hardjoprajitno (CTG) em urina e apos realização da PCR com os, iniciadores Lep13/Lep14 foi possível detectar ate 10²céls/mL. Foi utilizada, também, a técnica de RAPD-PCR com os iniciadores B11/B12 para a diferenciação entre as sorovariedades bratislava, tarassovi, pomona, szwajizak, hardjo/Hardjoprajitno (OMS), hardjo/Hardjoprajitno (CTG) e mini, como também para caracterização de diluições de L. hardjo/Hardjoprajitno (CTG) em urina. No primeiro caso, foi obtido, após a RAPD-PCR, um perfil de bandas diferenciado e característico e, com isso, foi possível identificar cada amostra testada. No segundo caso, foi possível detectar amplificação de até 10 4céls/mL. Os resultados obtidos demonstram que a PCR pode ser utilizada na detecção de Leptospira sp em amostras de urina e a RAPD-PCR pode ser utilizada na identificação, caracterização e diferenciação de sorovariedades.