Avaliação dos efeitos induzidos pelo ácido nicotínico e pela nicotinamida sobre a migração de neutrófilos induzida por diferentes estímulos inflamatórios em camundongos

• Main Author: Raphael Gomes Ferreira
• Other Authors: Andre Klein
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2011
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8NHMV8

=== During the last decades some sutudies have shown that nicotinic acid (NIA) and nicotinamide (NIC), vitamins of the B3 family, besides the known nutritional functions, have antiinflammatory properties. Therefore, to better understand how these vitamins can interfere with the process of cell migration to inflamed focus, male Balb/c mice, weighing 20-25 g, were challenged with carrageenan (200 g/cavity-0.1ml), zymosan (ZYM 200 g/cavity-0.1 ml), leukotriene B4 (LTB4 500 ng/cavity-0.1 mL) or interleukin-8 (IL-8 60 ng/cavity-0.1 mL) to pleurisy induction. These mice were treated with NIC (250, 500, 1000 mg/Kg-0.2 mL, per os) or NIA (150, 300, 600 mg/Kg-0.2 mL, per os) 30 min before and 1 h after the challenge with the inflammatory agents. Four hours after the challenge, the animals were euthanized in CO2 chamber, the lavage of pleural cavity was collected, centrifuged and the precipitate was used to perform the total and differential counting of leukocytes. The double treatment with NIC (1000 mg/Kg) reduced the migration of neutrophils to pleural cavity of mice challenged with CG, ZYM, LTB4 e IL-8. The double treatment with NIA (600 mg/Kg) also reduced the neutrophil migration in mice challenged with CG, ZYM, LTB4 and IL-8. To assess the profile of the adhesion and rolling of leukocyte, a protocol of intravital microscopy was performed. The mice were treated with NIC (1000 mg/Kg) or NIA (600 mg/Kg), 30 min before and 1 h after the challenge with CG (100 g/0.1 mL) injected directly into the scrotum. Four hours after the challenge with CG, images were collected from microcirculation of cremaster muscle with the aid of a fluorescence microscope. The analysis of images revealed that the double treatment with NIC or NIA reduced the process of rolling and adhesion of leukocytes on microcirculation of the cremaster muscle of mice. In addition, after the capture of images, the mice were euthanized, the cremaster muscle was collected and used for histological analysis. The qualitative analysis of the slides revealed a lower number of leukocytes in the interstitial region of mice treated with NIC and NIA compared to untreated mice. In conclusion, the results demonstrated that the treatment with NIC and NIA reduced the neutrophil migration to pleural cavity of mice challenged with different inflammatory agents. The treatment with B3 vitamins also reduced rolling and adhesion of leukocytes on microcirculation of cremaster muscle, so the inhibition on the neutrophil migration to pleural cavity of the mice could be explained, in part by the reduction of leukocyte rolling and adhesion induced by NIC e NIA. === Nas últimas décadas, alguns estudos demonstraram que o ácido nicotínico (NIA) e a nicotinamida (NIC), vitaminas da família B3, além das conhecidas funções nutricionais também apresentavam propriedades anti-inflamatórias. Para melhor entender como o tratamento com essas vitaminas interfere no processo de migração celular para o foco inflamatório, camundongos Balb/c machos, com massas entre 20-25 g, foram desafiados com carragenina (CG 200 g/cavidade-0,1 mL), zimosano (ZYM 200 g/cavidade-0,1 mL), leucotrieno B4 (LTB4 500 ng/cavidade-0,1 mL) ou interleucina-8 (IL-8 60 ng/cavidade-0,1 mL) para indução de pleurisia. Os animais foram tratados com NIC (250, 500 ou 1000 mg/Kg-0,2 mL, per os) ou NIA (150, 300 ou 600 mg/Kg-0,2 mL, per os) 30 min antes e 1 h após o desafio com os agentes flogogênicos. Os camundongos foram eutanasiados em câmara de CO2 4 h após o desafio, o lavado da cavidade pleural coletado, centrifugado e o precipitado utilizado para realização da contagem total e diferencial de leucócitos. O duplo tratamento com NIC (1000 mg/Kg) reduziu a migração de neutrófilos para a cavidade pleural de camundongos desafiados por CG, ZYM, LTB4 e IL-8. O duplo tratamento com NIA (600 mg/Kg) também reduziu a migração de neutrófilos em camundongos desafiados com CG, ZYM, LTB4 e IL-8. Para avaliar a adesão e o rolamento de leucócitos, foi realizado um protocolo de microscopia intravital. Os camundongos foram tratados com NIC (1000 mg/Kg) e ou NIA (600 mg/Kg), 30 min antes e 1 h após desafio com CG (100 g/cavidade) injetada diretamente na bolsa escrotal. Quatro horas após o desafio com CG, foram coletadas imagens da microcirculação do músculo cremaster com auxílio de um microscópio de fluorescência. A análise das imagens revelou que o duplo tratamento com NIC ou NIA reduziu o rolamento e a adesão de leucócitos na microcirculação do músculo cremaster de camundongos. Após a captação das imagens os animais foram eutanasiados, o músculo cremaster foi coletado e utilizado para confecção de lâminas para análise histológica. A análise qualitativa das lâminas revelou menor número de leucócitos na região intersticial nos animais tratados com NIC e NIA em relação aos animais não tratados. Concluindo, os resultados demonstram que o tratamento com NIC ou NIA reduziu a migração de neutrófilos para a cavidade pleural de camundongos desafiados com diferentes agentes flogogênicos. O tratamento com as vitaminas também reduziu o rolamento e a adesão de leucócitos na microcirculação do músculo cremaster, o que pode justificar, pelo menos em parte, a redução do número de neutrófilos na cavidade pleural de camundongos desafiados com diferentes agentes flogogênicos.