Modulação do sistema endocanabinoide sobre respostas neuroinflamatórias em modelo animal de encefalite causada pelo vírus Herpes simplex tipo 1

• Main Author: Viviane Mitsuko Neves Saito
• Other Authors: Fabricio de Araujo Moreira
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2011
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8NHKQG

=== The Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a pathogen known to cause recurrent skin lesions and to establish a latent state between manifestations. However, the most serious consequence of HSV-1 infection is herpes encephalitis (HSE), affecting mainly immunocompromised patients and neonates. Once the infection reaches the cerebral tissue, several inflammatory mechanisms are triggered to defend the host against the virus. The aim of this research was to investigate the modulatory role of the cannabinoid agonist WIN55,212-2 on the development of inflammatory and behavioral changes in mice with HSE. Male C57BL/6 mice, aged 8 to 12 weeks, were used in this study. These animals were intracranially inoculated with 102 plaque forming units (PFU) of HSV-1, while the uninfected control group received only PBS by the same route. Mice were also treated with WIN55,212-2 (1 mg/kg) or vehicle intraperitoneally (i.p), and the treatment started the day before infection and continued until euthanasia. In the first stage of the project, we used untreated infected mice (HSV+VEH) and treated infected mice (HSV + WIN) to build a lethality curve and to assess the onset of clinical signs, for 10 days post infection (10 dpi) using the SHIRPA battery. Thereafter, another data set was obtained on the 4 dpi, regarding the brain levels of cytokines and histopathology of the hippocampus. For this we used four experimental groups (uninfected untreated mice - CTRL + VEH; uninfected treated mice - CTRL + WIN; untreated infected mice - HSV + VEH, and infected treated mice - HSV + WIN). At last, we assessed specific behavioral changes in animal models of anxiety and memory, i.e, Inhibitory Avoidance paradigm, the Elevated Plus Maze and Social Recognition Test, all held between 1 and 2 dpi. Three groups had their results compared (CTRL+VEH, HSV+VEH and HSV+WIN). Animals from this experiment were euthanized on 3 dpi for microscopic analysis of neuronal loss in the hippocampus. Surprisingly, the results indicate that clinical signs (such as marked loss of body weight, changes in reflexes, sensory function and lowering in the neuropsychiatric status) first appeared in HSV+WIN mice and then in HSV+VEH animals. The survival rate of HSV+WIN mice was also lower (100% mortality on 6 dpi) compared to HSV+VEH group (100% mortality on 10 dpi). Short-term social memory was also impaired in HSV+WIN mice, whereas HSV+VEH mice showed only mild damage. However, no differences were found between groups concerning the acquisition, consolidation and retrieval of aversive memory in the Inhibitory Avoidance paradigm. In the EPM, HSV+VEH mice exhibited lower rates of anxiety-like behavior than HSV+WIN animals. The levels of IL-1 and TNF- were increased in infected mice, regardless of treatment. Data from histopathological analysis and quantification of neuronal death in the hippocampus also did not differ significantly between HSV+VEH and HSV+WIN groups. Therefore, it is concluded that treatment with the cannabinoid agonist WIN55,212-2 had a deleterious effect on the course of HSE in C57BL/6 mice, accelerating mortality and promoting more prominent symptoms of the disease, although it did not directly influenced the levels of cytokines or cellular/tissue loss in mice brain. === O vírus Herpes simplex do tipo 1 (HSV-1) é conhecido por causar lesões cutâneas recorrentes, estabelecendo um estado de latência entre as manifestações, porém a mais grave consequência da infecção por HSV-1 é a encefalite (HSE), que pode acometer pacientes imunocomprometidos e neonatos. Uma vez que a infecção atinge o tecido cerebral, diversos mecanismos inflamatórios são elaborados em resposta ao vírus. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel modulador do agonista canabinoide WIN55,212-2 no desenvolvimento de respostas inflamatórias e comportamentais em animais portadores de HSE. Foram utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6, com idade entre 8 e 12 semanas. Estes animais foram inoculados intracranialmente com 102 unidades formadoras de placa (PFU) de vírus HSV-1, enquanto que o grupo controle não infectado recebeu apenas PBS pela mesma via. Os camundongos também foram tratados com WIN55,212-2 (1 mg/kg) ou veículo pela via intraperitoneal (i.p), sendo que o tratamento teve início no dia anterior à infecção e continuou até a eutanásia. Na primeira etapa do projeto, foram utilizados camundongos infectados não tratados (HSV+VEH) e infectados tratados (HSV+WIN) para construir uma curva de letalidade e para avaliar por meio da bateria SHIRPA o aparecimento de sinais clínicos durante 10 dias após a infecção (10 dpi). Na segunda etapa foram obtidos dados acerca dos níveis cerebrais de citocinas e análise histopatológica do hipocampo, referentes ao 4º dpi. Para isso foram utilizados quatro grupos experimentais (camundongos não infectados não tratados - CTRL+VEH; camundongos não infectados tratados - CTRL+WIN; camundongos infectados não tratados - HSV+VEH, e camundongos infectados tratados - HSV+WIN). Na última etapa do trabalho, três grupos tiveram seu desempenho comparado (CTRL+VEH, HSV+VEH e HSV+WIN) em modelos animais preditivos de comportamento. Foram avaliadas alterações comportamentais específicas de memória e ansiedade nos modelos animais de Esquiva Inibitória, Labirinto em Cruz Elevado e Teste de Reconhecimento Social, realizados entre os dias 1 e 2 dpi. Os animais desta etapa foram eutanasiados no 3º dpi para a análise microscópica da morte neuronal no hipocampo. Surpreendentemente, os resultados indicam que sinais clínicos como perda acentuada de massa corporal, alterações nos reflexos, na função sensorial e rebaixamento no estado neuropsiquiátrico aparecem primeiro em camundongos HSV+WIN e só depois nos animais HSV+VEH. A sobrevivência dos camundongos HSV+WIN também foi menor (100% de mortalidade no 6º dpi) em comparação ao grupo HSV+VEH (100% de mortalidade em 10 dpi). A memória social de curto prazo também estava prejudicada em camundongos HSV+WIN enquanto que camundongos HSV+VEH apresentaram apenas prejuízos leves. Contudo, não houve diferenças entre grupos quanto à aquisição, consolidação e recuperação de memória aversiva no teste da Esquiva Inibitória. No LCE, camundongos HSV+VEH exibiram menor índice de comportamento do tipo ansioso que os animais HSV+WIN. Os níveis das citocinas IL-1 e TNF- se mostraram elevados em camundongos infectados, independente do tratamento. A morte neuronal no hipocampo e os dados da análise histopatológica também não apresentaram diferença significativa entre os grupos HSV+VEH e HSV+WIN. Dessa forma conclui-se que o tratamento com o agonista canabinoide WIN55,212-2 exerceu efeito deletério sobre o curso da HSE em camundongos da linhagem C57BL/6, acelerando a mortalidade e promovendo sintomas mais proeminentes da doença, embora não tenha influenciado diretamente os níveis de citocinas nem a perda celular e tecidual no cérebro dos animais.