Imunofenotipagem de precursores neurais diferenciados in vitro a partir de célulastronco embrionárias de camundongos

• Main Author: Paloma de Alvarenga Cortes
• Other Authors: Rosa Maria Esteves Arantes
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2010
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8GXMUE

=== Embryonic stem cells has been the focus of studies because they are a promising source for cell therapy, since they proliferate without limits, respond to molecular signals and are easily accessible to genetic manipulation. In order to differentiate these cells into neural precursors and mature neurons, to obtain material for treatment of neurodegenerative diseases like Parkinson's disease, a five-step protocol was described in the literature and has been widely studied. In this study we intend to manipulate the current protocols, controlling the differentiation phenotype in vitro of a new line of embryonic stem cell (CT-4) isolated at Laboratório de Reprodução Humana Prof. Dr. Aroldo Fernando Camargos, Hospital das Clínicas, UFMG by immuno-phenotyping, to obtain a high rate of Tirosine Hidroxilase-positive neurons. The percentage of undifferentiated cells (SSEA-1+) decreased substantially along the stages and at stage 5 less than 2% of total cells were SSEA-1+. The neural precursors (nestin-positive) also decreased gradually in the stages of differentiation (between stages 3 and 5), whereas the expression of panneuronal (PGP) and dopaminergic neurons (TH) markers remained virtually stable, at 20% and 10% respectively. Our protocol has promoted terminal differentiation (neuronal) instead of proliferation of neural precursors, which may have reduced the number of dopaminergic neurons at the end. === Diante da promessa de cura de diversas doenças as pesquisas com célulastronco estão em franca expansão. As células-tronco embrionárias tem sido foco de estudos por serem uma fonte promissora para terapia celular, já que proliferam sem limites, respondem a sinais moleculares e são facilmente acessíveis à manipulação genética. Tendo em vista a diferenciação destas células em precursores neurais e em neurônios maduros, com intuito de obter material para tratamento de doenças neurodegenerativas como a Doença de Parkinson, um protocolo de cinco passos foi descrito na literatura e vem sendo amplamente estudado. No presente estudo adaptamos este protocolo com algumas modificações, acompanhamos a diferenciação fenotípica in vitro de uma nova linhagem de célula-tronco embrionária (CT-4) isolada no Laboratório de Reprodução Humana Prof. Dr. Aroldo Fernando Camargos do Hospital das Clínicas da UFMG através de imunofenotipagem, objetivando uma alta taxa de diferenciação das mesmas em neurônios Tirosina Hidroxilase positivos. Constatamos que a porcentagem de células indiferenciadas (SSEA-1+) reduziu substancialmente ao longo dos estágios, sendo 1,67±0,11% do total das células ao final do estágio 5. Os precursores neurais (nestina+) também reduziram progressivamente nos estágios de diferenciação (entre os estágios 3 e 5), enquanto a expressão de marcadores pan-neuronal (PGP) e de neurônios dopaminérgicos (TH) permaneceram praticamente estáveis, variando entre 19,58±2,49 a 20,8±1,95% e 12,2±1,53 a 11,95±1,52%, respectivamente. Dessa forma, consideramos que nosso protocolo favoreceu a diferenciação terminal (neuronal), em detrimento da proliferação de precursores neurais, o que pode ter reduzido o número de neurônios dopaminérgicos ao final do cultivo.