Padronização de um ELISA indireto para o diagnóstico da imunodeficiência felina a vírus

• Main Author: Fabiana Alves
• Other Authors: Jenner Karlisson Pimenta dos Reis
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2010
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8EHKP4

=== Feline immunodeficiency virus (FIV) is a lentivirus that infects felids. FIV infection leads to a chronic disease and immunodeficiency. Clinical diagnosis is not reliable, which makes laboratory diagnosis necessary. The aim of this study was to establish and standardize an indirect ELISA for diagnosis of FIV, using a capsid protein p24 recombinant antigen (r-p24). Additionally, the occurrence of FIV infection in the Belo Horizonte metropolitan area was studied using PCR and immunochromatography SNAP Combo Plus. Conflicting results between both tests were confirmed by Western blot using the r-p24. Serum samples from 150 cats were used: 78 from asymptomatic cats belonging to private owners and from shelters of Belo Horizonte metropolitan area, Minas Gerais, and additional 72 samples donated by Veterinary Clinic Department of Universidade de São Paulo (USP), SP, previously tested by SNAP Combo Plus and PCR. For the of amplification 244 base pars (bp) fragment of the FIV gag gene the oligonucleotide primers were designed. The r-p24 (3.14 g/cm = 0.095 g/animal) was used for the Western blot. The indirect ELISA was standardized using 2.5 ng/ml of r-p24, 1:320 serum dilution and conjugate diluted 1:7500 (anti-feline IgG peroxidase). The r-p24 ELISA showed a 97% sensitivity and 93% specificity when compared to the gold test SNAP Combo Plus, with a Kappa index of 0.83. For the FIV occurrence study in Belo Horizonte, three animals (3.85%) were positive, showing that infected asymptomatic cats can disseminate the virus. Our results indicate that r-p24 ELISA is a sensitive, specific, and simple technique for FIV routine diagnosis and research. === O Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) é um lentivírus que infecta os membros da família Felidae. A infecção causada pelo FIV leva a uma doença crônica e à imunodeficiência. O diagnóstico baseado apenas nos sinais clínicos não é confiável, o que torna necessário o diagnóstico laboratorial. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer e padronizar uma prova de ELISA indireto, utilizando-se o antígeno recombinante da proteína de capsídeo p24, a r-p24, baseado na sequência genômica do FIV-B. Adicionalmente, uma avaliação da ocorrência da infecção na região metropolitana de Belo Horizonte foi realizada, utilizando-se as técnicas de PCR e imunocromatografia SNAP Combo Plus. Os resultados conflitantes quando comparado aos dois testes, foram confirmados a partir do Western blot utilizando-se a r-p24. Foram utilizadas 150 amostras de soro durante o experimento: 78 de gatos assintomáticos de proprietários particulares e de abrigos da região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, e outras 72 amostras doadas pelo Departamento de Clínica Veterinária da Universidade de São Paulo (USP), SP, previamente testadas pelo SNAP Combo Plus e por PCR. Para a PCR foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores para amplificação de um fragmento de 244 pares de bases (pb) dentro da região correspondente ao gene gag do FIV. Para a técnica de Western blot foi utilizado o antígeno recombinante da proteína de capsídeo, a r-p24 (3,14 g/cm = 0,095 g/animal). O ELISA indireto foi padronizado utilizando-se 2,5 ng/ml da r-p24, soro na diluição de 1:320 e conjugado (peroxidadse anti-felino IgG) na diluição de 1:7500. O r-p24 ELISA apresentou uma sensibilidade de 97% e uma especificidade de 93%, quando comparado ao teste ouro SNAP Combo Plus, com índice Kappa igual a 0,83. A partir da análise da ocorrência do FIV em Belo Horizonte, três animais (3,85%) foram positivos para o FIV, demonstrando que animais assintomáticos infectados são potenciais transmissores do vírus. Baseado nos dados obtidos da estabilização e padronização do teste, conclui-se que o r-p24 ELISA é uma técnica sensível, específica e prática para o diagnóstico de rotina e ou pesquisa da infecção pelo FIV.