Detecção de Campylobacter fetus em lavados prepuciais de touros pela PCR

• Main Author: Ana Paula Reinato Stynen
• Other Authors: Andrey Pereira Lage
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2000
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUDB-8BQGN8

=== A PCR based on the 23S rDNA sequence was developed for the detection of C. fetus from preputial washings of bulls. Three extraction methods were evaluated for the extraction of DNA in preputial washings: the guanidiniu, tiocynate, the alkaline lysis and the Chelex 100 methods. To determine the specificity of the test, Camppylobacter sp, Helicobacter sp and Escherichia coli reference strains were submitted to PCR. Preputial washings of 47 bulls from one farm with a positive diagnosis of Bovine Genital Campilobactosis were tested by PCR and direct fluorescent antibody test (DFAT). Only C. fetus subps, fetus and C.fetus subps, venerealis were amplified by PCR and the detection limit was 3,8 x 10² CFU/ml of C. fetus. The specificity of the amplified product was confirmed by restriction analysis with Avall. Eight bulls were considered infected by the two tecniques, but three animals were only positive by PCR and seven only by DFAT. The present PCR assay was suitable to detect C. fetus in preputial washing samples. === Uma reação em cadeia da polimerase (PCR) baseada na seqüência 23S do DNA ribossomal foi desenvolvida para detecção de C. fetus em lavados prepuciais de touros. Foram avaliados três métodos de extração de DNA nos lavados prepuciais: o método do tiocianato de guanidina, o da lise alcalina e do Chelex 100. Para determinar a especificidade do teste, amostras de referência de Campylobacter SP, Helicobacter SP e Escherichia coli forma submetidas a PCR. Lavados prepuciais de 47 touros de uma propriedade com diagnóstico de Campilobacteriose Genital Bovina foram testados pela PCR e imunofluorescência direta (IFD). Somente amostras de C. fetus subps. venerealis e C. fetus subps. fetus foram amplificadas e o limite de detecção da PCR em lavado prepucial foi de 3,8 x 102 CFU/ml de C. fetus. A especificidade do produto amplificado foi confirmada pela análise de restrição frente à enzima Ava II. Oito touros foram considerados infectados pelas duas técnicas, porém três animais só foram positivos à PCR e sete somente na IFD. A PCR padronizada mostrou-se eficiente na detecção de C. fetus em amostras de lavado prepucial, nas condições trabalhadas.