Influência do óxido nítrico na infecção experimental por Ascaris suum durante a fase inicial da ascaridíase

• Main Author: Caroline Cavalcanti da Silva
• Other Authors: Ricardo Toshio Fujiwara
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2014
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9P3FCL

=== Ascariasis is the most common geohelminth infection worldwide. The biological aspects related to ascariasis are remain unclear, as well as immunological and histopathological mechanisms, especially during the early phase of infection. Several studies have shown that nitric oxide is involved as a mediator in other parasitic infections and also affects the survival of the parasites in the host. Thus, the goal of this work was to study the influence of nitric oxide during the early stage of infection by Ascaris suum, by in vitro production of nitrite using the Griess reagent and cell viability by MTT assay in C57BL/6 cells stimulated by excreted/secreted antigens of A. suum larvae. Inhibitors of nitric oxide synthase (NOS), Nomega- nitro-L-arginine (LNMMA) and L-N6- (1-iminoethyl) lysine (LNIL) were used. Furthermore, we compared the parasitic load of C57BL/6 mice and animals deficient for inducible nitric oxide synthase (iNOS-/-), during migration of larvae of A. suum in the liver and lung. Histopathological and haematological procedures were also evaluated, as well as, the profile of serum cytokines and activity of eosinophil peroxidase (EPO) and neutrophils myeloperoxidase (MPO). The data showed a nitric oxide production in mouse cells stimulated by excreted/secreted antigens of A. suum larvae and these cells restored viability when inhibitors of NOS were used. During the experimental infection, higher number of larvae in the liver of iNOS-/- were found as compared to C57BL/6 (p <0.0001). In the histopathological analyses larger area of injury in the lung and reduced area of inflammatory infiltration were observed in the liver of iNOS-/- compared to wild type mice. In iNOS-/- mice we observed an absence in the modulation mediated of cytokines such as TNF- and IFN- acting in the early phase of infection, that might contribute to the failure or delay to eliminate the parasite. In the same animals, the hematopoiesis was affected and observed by the reduction in the number of erythrocytes and a substantial increase in the number of platelets. The formation of granulomas was observed only in animals iNOS-/-. In conclusion to the presented results, we showed that production of nitric oxide affects parasite migration and is involved in the immune response against A. suum. === Ascaridíase é a geohelmintose mais frequente no mundo. Os aspectos biológicos frente à ascaridíase ainda não estão esclarecidos, bem como os mecanismos imunológicos e histopatológicos, principalmente na fase inicial da infecção. Diversos estudos mostram que o óxido nítrico está envolvido como mediador em outras infecções parasitárias e também no processo de sobrevivência dos parasitos no hospedeiro. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi o estudo da influência do óxido nítrico frente à infecção por Ascaris suum, na sua fase inicial pela produção in vitro de nitrito utilizando o reagente de Griess e a viabilidade celular pelo ensaio de MTT em células de camundongos C57BL/6 estimuladas com antígenos excretados/secretados de larva de A. suum. Foram utilizados inibidores de óxido nítrico sintase (NOS), N-omega-nitro-L-arginina (LNMMA) e L-N6-(1-iminoetil) lisina (LNIL). Ademais, foi analisada a carga parasitária de animais C57BL/6 e animais geneticamente modificados para óxido nítrico sintase induzível (iNOS-/-), infectados com A. suum, durante a migração da larva no fígado e no pulmão. Foram avaliados também, os processos histopatológicos, hematológicos, o perfil de citocinas séricas por CBA e a atividade da peroxidase de eosinófilo (EPO) e mieloperoxidase (MPO) de neutrófilos nos tecidos. Os dados obtidos mostraram que houve uma produção de óxido nítrico em células de camundongos estimuladas com antígenos excretados/secretados de larva de A. suum e que células estimuladas restauraram sua viabilidade quando utilizados os inibidores de NOS. Na infecção experimental, foram encontrados um maior número de larvas no fígado de animais iNOS-/- quando comparados com os animais C57BL/6 (p<0,0001). Nas análises histopatológicas foram observadas maior área de lesão no pulmão e menor área de infiltrado inflamatório no parênquima hepático dos animais iNOS-/- em relação aos animais selvagens. Em animais geneticamente deficientes para iNOS a ausência na modulação mediada por citocinas, como TNF-á, IFN-ã atuantes na fase inicial da infecção, contribui para o fracasso ou retardo na eliminação do parasito. Nesses mesmos animais houve um desequilíbrio na hematopoese observadas pela redução no número de eritrócitos e aumento substancial no número de plaquetas. Foi possível observar exclusivamente em animais iNOS-/- a formação de granulomas no parênquima hepático. Diante desses resultados acredita-se que haja uma participação de forma ativa do óxido nítrico na infecção por A. suum.